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目的:探讨阿片类毒品(Opiates)滥用对HIV-1感染者细胞信号通路TLR9/MyD88/IRF7关键因子表达水平的影响,为阐明阿片类毒品促进HIV-1复制的作用机制奠定基础。
方法:研究对象分为4组,即阿片类毒品滥用的HIV-1感染组(Opiates HIV(+)组)、阿片类毒品滥用非HIV-1感染组(Opiates HIV(-)组)、非阿片类毒品滥用的HIV感染组(Non-Opiates HIV(+)组)和健康对照组(Control组)。制定严格的纳入和排除标准,在南宁、柳州、钦州市等所辖市区县的美沙酮门诊、艾滋病自愿咨询检测门诊,根据国家艾滋病疫情信息上报系统,遵循知情同意的原则,随机招募研究对象200名。通过问卷调查研究对象的人口学特征,并采集研究对象的外周静脉血,若为HIV阳性者则检测病毒载量和CD4+T淋巴细胞,从所有研究对象血样分离出外周血单核细胞(PBMCs),提取RNA,采用实时荧光定量PCR法检测4组人群PBMCs中TLR9、MyD88、IRF7、IFN-α、IFN-β、ISG56、MxA的mRNA表达水平。采用2×2析因设计的方差分析验证阿片类毒品的滥用和HIV感染是否存在交互作用,采用GLM模块的UNIANOVA语句和EMMEANs子句实现法以及成组设计的单因素方差分析比较4组人群的组间因子相对表达量的差异。
结果:1.研究对象平均年龄为(31.2±4.1)岁;男性占55.5%,女性占44.5%;文化程度以初中或初中以下为主,占58.5%;婚姻状况以已婚为主,占44.5%。4组人群在年龄、性别、民族、户籍所在地、婚姻状况、文化程度与职业等人口学特征方面差异均无统计学意义(P>0.05)。
2.在HIV阳性人群中,阿片类毒品滥用者病毒载量中位数为4.450×103cp/ml,高于非阿片类毒品滥用者(3.977×103cp/ml),两组间差异具有统计学意义(P<0.05);阿片类毒品滥用者CD4+T淋巴细胞平均值是(4.036±1.628)×102cell/ml,低于非阿片类毒品滥用者的平均值(5.031±2.342)×102cell/ml,两组间差异具有统计学意义(P<0.05)。
3.TLR9相对表达量在Opiates HIV(+)、Non-Opiates HIV(+)、Opiates HIV(-)、Control组中分别为(2.133±1.591)×10-3、(3.657±2.224)×10-3、(1.958±1.421)×10-3、(7.664±4.866)×10-3。阿片类毒品滥用和HIV感染对TLR9的表达存在交互作用。单独效应分析结果显示,在HIV阳性人群中,阿片类毒品滥用者TLR9相对表达量低于非毒品滥用者,两组间差异有统计学意义(P<0.05);在HIV阴性人群中,阿片类毒品滥用者低于非毒品滥用者,两组间差异有统计学意义(P<0.05);在吸毒人群中,HIV阳性者与HIV阴性者两组间差异没有统计学意义(P>0.05);在不吸毒人群中,HIV阳性者低于正常组,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。
4.MyD88的相对表达量平均值在Opiates HIV(+)组与Non-Opiates HIV(+)组中分别为(2.213±0.682)×10-1、(2.560±1.112)×10-1,Opiates HIV(+)组低于Non-Opiates HIV(+)组,两组间差异有统计学意义(P<0.05);IRF7的相对表达量在Opiates HIV(+)组与Non-OpiatesHIV(+)组中分别为(4.739±3.128)×10-2、(3.335±1.675)×10-2,Opiates HIV(+)组高于Non-Opiates HIV(+)组,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。
5.IFN-α的相对表达量在Opiates HIV(+)组与Non-Opiates HIV(+)组中分别为(2.079±2.531)×10-3、(5.336±3.782)×10-3,Opiates HIV(+)组低于Non-Opiates HIV(+)组,两组间差异有统计学意义(P<0.05);IFN-β的相对表达量在Opiates HIV(+)组与Non-Opiates HIV(+)组中分别为(3.867±2.547)×10-4、(7.761±4.910)×10-4,Opiates HIV(+)组低于Non-Opiates HIV(+)组,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。
6.ISG56的相对表达量在Opiates HIV(+)组与Non-Opiates HIV(+)组中分别为(4.089±2.694)×10-2、(3.573±2.081)×10-2,两组间差异无统计学意义(P>0.05);MxA的相对表达量在Opiates HIV(+)组与Non-Opiates HIV(+)组中分别为(3.452±2.431)×10-1、(3.221±1.612)×10-1,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。
结论:HIV-1感染人群中,滥用阿片类毒品者的HIV-1病毒载量较非滥用毒品者高,而其CD4+T淋巴细胞数量较非滥用毒品者低;阿片类毒品滥用可以抑制外周血单核细胞(PBMCs)的TLR9和MyD88的表达,同时下调IFN-α和IFN-β的产生,从而影响TLR9/MyD88/IRF7信号通路,减弱了其抗病毒效应,这可能是阿片类毒品促进HIV-1复制的作用机制。
方法:研究对象分为4组,即阿片类毒品滥用的HIV-1感染组(Opiates HIV(+)组)、阿片类毒品滥用非HIV-1感染组(Opiates HIV(-)组)、非阿片类毒品滥用的HIV感染组(Non-Opiates HIV(+)组)和健康对照组(Control组)。制定严格的纳入和排除标准,在南宁、柳州、钦州市等所辖市区县的美沙酮门诊、艾滋病自愿咨询检测门诊,根据国家艾滋病疫情信息上报系统,遵循知情同意的原则,随机招募研究对象200名。通过问卷调查研究对象的人口学特征,并采集研究对象的外周静脉血,若为HIV阳性者则检测病毒载量和CD4+T淋巴细胞,从所有研究对象血样分离出外周血单核细胞(PBMCs),提取RNA,采用实时荧光定量PCR法检测4组人群PBMCs中TLR9、MyD88、IRF7、IFN-α、IFN-β、ISG56、MxA的mRNA表达水平。采用2×2析因设计的方差分析验证阿片类毒品的滥用和HIV感染是否存在交互作用,采用GLM模块的UNIANOVA语句和EMMEANs子句实现法以及成组设计的单因素方差分析比较4组人群的组间因子相对表达量的差异。
结果:1.研究对象平均年龄为(31.2±4.1)岁;男性占55.5%,女性占44.5%;文化程度以初中或初中以下为主,占58.5%;婚姻状况以已婚为主,占44.5%。4组人群在年龄、性别、民族、户籍所在地、婚姻状况、文化程度与职业等人口学特征方面差异均无统计学意义(P>0.05)。
2.在HIV阳性人群中,阿片类毒品滥用者病毒载量中位数为4.450×103cp/ml,高于非阿片类毒品滥用者(3.977×103cp/ml),两组间差异具有统计学意义(P<0.05);阿片类毒品滥用者CD4+T淋巴细胞平均值是(4.036±1.628)×102cell/ml,低于非阿片类毒品滥用者的平均值(5.031±2.342)×102cell/ml,两组间差异具有统计学意义(P<0.05)。
3.TLR9相对表达量在Opiates HIV(+)、Non-Opiates HIV(+)、Opiates HIV(-)、Control组中分别为(2.133±1.591)×10-3、(3.657±2.224)×10-3、(1.958±1.421)×10-3、(7.664±4.866)×10-3。阿片类毒品滥用和HIV感染对TLR9的表达存在交互作用。单独效应分析结果显示,在HIV阳性人群中,阿片类毒品滥用者TLR9相对表达量低于非毒品滥用者,两组间差异有统计学意义(P<0.05);在HIV阴性人群中,阿片类毒品滥用者低于非毒品滥用者,两组间差异有统计学意义(P<0.05);在吸毒人群中,HIV阳性者与HIV阴性者两组间差异没有统计学意义(P>0.05);在不吸毒人群中,HIV阳性者低于正常组,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。
4.MyD88的相对表达量平均值在Opiates HIV(+)组与Non-Opiates HIV(+)组中分别为(2.213±0.682)×10-1、(2.560±1.112)×10-1,Opiates HIV(+)组低于Non-Opiates HIV(+)组,两组间差异有统计学意义(P<0.05);IRF7的相对表达量在Opiates HIV(+)组与Non-OpiatesHIV(+)组中分别为(4.739±3.128)×10-2、(3.335±1.675)×10-2,Opiates HIV(+)组高于Non-Opiates HIV(+)组,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。
5.IFN-α的相对表达量在Opiates HIV(+)组与Non-Opiates HIV(+)组中分别为(2.079±2.531)×10-3、(5.336±3.782)×10-3,Opiates HIV(+)组低于Non-Opiates HIV(+)组,两组间差异有统计学意义(P<0.05);IFN-β的相对表达量在Opiates HIV(+)组与Non-Opiates HIV(+)组中分别为(3.867±2.547)×10-4、(7.761±4.910)×10-4,Opiates HIV(+)组低于Non-Opiates HIV(+)组,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。
6.ISG56的相对表达量在Opiates HIV(+)组与Non-Opiates HIV(+)组中分别为(4.089±2.694)×10-2、(3.573±2.081)×10-2,两组间差异无统计学意义(P>0.05);MxA的相对表达量在Opiates HIV(+)组与Non-Opiates HIV(+)组中分别为(3.452±2.431)×10-1、(3.221±1.612)×10-1,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。
结论:HIV-1感染人群中,滥用阿片类毒品者的HIV-1病毒载量较非滥用毒品者高,而其CD4+T淋巴细胞数量较非滥用毒品者低;阿片类毒品滥用可以抑制外周血单核细胞(PBMCs)的TLR9和MyD88的表达,同时下调IFN-α和IFN-β的产生,从而影响TLR9/MyD88/IRF7信号通路,减弱了其抗病毒效应,这可能是阿片类毒品促进HIV-1复制的作用机制。