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目的:动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是一种慢性炎症疾病,以动脉粥样硬化作为主要病理基础的心脑血管疾病的发病率逐年攀升,对人类健康产生了重大的威胁。大量的研究证明,动脉粥样硬化主要发生于大型弹性动脉及中型弹性动脉,其发病过程存在诸多危险因素,其中,血液中的低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-c)为主要的独立危险因素。G蛋白偶联受体 124(G protein-coupled receptor 124,GPR124)为粘附性 GPCR 亚家族的成员,目前尚未脱孤。近些年的研究证明,GPR124在血管发育及血管新生过程中表现出极为重要的作用。但是,关于GPR124在成体动物心血管疾病中的角色与作用尚未见报道。本课题探索了血管内皮细胞GPR124在动脉粥样硬化发生及发展过程中的作用,旨在为动脉粥样硬化发病机制的研究提供新的发现和证据。方法:(1)采用血管内皮细胞过表达GPR124小鼠结合高脂饲养构建动脉粥样硬化模型鼠。基于Tet-On基因表达调控系统,我们构建了 Tie-2特异性启动子启动的GPR124过表达转基因小鼠。通过饲以Tet系统诱导药物强力霉素(Doxycycline,Dox)蔗糖溶液启动GPR124在内皮细胞的表达。本实验对模型鼠的DNA样本进行了基因鉴定。在此基因过表达小鼠的基础上,通过尾静脉注射AAV-PCSK9DY使人源PCSK9DY基因在小鼠肝脏特异性表达,同时辅助饲喂42%供能的高脂饲料16周,从而构建了动脉粥样硬化动物模型;(2)检测模型鼠动脉粥样硬化病理过程的相关指标。首先,我们检测了小鼠血液中的总胆固醇(Total cholesterol,TC)及低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-c)水平,同时通过油红O染色的方法评估主动脉根部的脂质沉积情况,并对沉积面积进行了统计;其次,结合免疫荧光技术检测平滑肌细胞标志物α-SMA的表达水平,从而评估病灶处平滑肌细胞的增殖情况;(3)为了探索GPR124在动脉粥样硬化病理过程中的作用,我们观察了小鼠主动脉根部病灶处内皮细胞炎症损伤情况,首先,本研究使用特异性识别ONOO-的小分子荧光探针NP3及硝基酪氨酸(Nitrotyrosine,NT)抗体检测了主动脉根部病灶处的硝化应激水平;其次,通过免疫荧光技术检测小鼠主动脉根部病灶处巨噬细胞标志物CD68、炎性相关蛋白NLPR3及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,caspases-1)的表达情况,从而判断病灶处的炎性损伤情况;(4)检测模型鼠中枢神经系统功能指标的变化。首先,通过旷场、Y-迷宫及新事物认知实验对小鼠的行为学进行检测;其次,通过免疫荧光技术检测小鼠海马区的phospho-CaMKII(Thr286)及星形胶质细胞标志物GFAP的表达情况。结果:(1)小鼠DNA样本的基因鉴定结果显示,本实验成功获得了内皮细胞过表达GPR124的小鼠品系。同时,小鼠肝脏组织的mRNA检测结果显示人源PCSK9DY在小鼠肝脏中稳定表达;(2)血液生化指标检测结果显示,在动脉粥样硬化模型中,内皮细胞过表达GPR124升高了小鼠血液内总胆固醇(Total cholesterol,TC)及低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-c)水平并促进主动脉根部脂质沉积;免疫荧光结果显示,在该模型下,内皮细胞过表达GPR124加重了主动脉根部平滑肌细胞增殖;(3)免疫荧光结果显示,在动脉粥样硬化模型下,内皮细胞过表达GPR124增强了病灶处的硝化应激水平,同时也加重了病灶处的内皮细胞炎性损伤;(4)动脉粥样硬化造模4月后行为学结果显示,内皮细胞过表达GPR124组相较于单一动脉粥样硬化模型组而言,尚未产生明显的认知关联行为学异常;同时免疫荧光结果显示,内皮细胞过表达GPR124组小鼠海马区的phospho-CaMKII(Thr286)、GFAP的表达情况相比单一动脉粥样硬化模型组未观测到明显异常。结论:本研究中,在内皮细胞过表达GPR124转基因小鼠品系的基础上,我们构建了动脉粥样硬化动物模型。研究结果表明:内皮细胞过表达GPR124升高了小鼠胆固醇及脂质沉积水平,促进了病灶处平滑肌细胞增殖,同时,加重了病灶处内皮细胞的炎性损伤。此外,本研究发现,动脉粥样硬化造模4月后,内皮细胞过表达GPR124尚未对实验小鼠认知功能产生影响。综上所述,血管内皮细胞GPR124参与动脉粥样硬化病理过程。靶向血管内皮细胞GPR124的调控可能对防治动脉粥样硬化疾病进程具有一定的作用。