【摘 要】
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犬恶丝虫（Dirofilaria immitis）是呈世界性分布的人兽共患寄生虫,主要危害犬、猫以及犬科和猫科的野生动物。随着全球气候变暖,温带和热带地区犬恶丝虫病的发病率在逐渐增加,严重威胁全球公共卫生安全。目前,该病在诊断方面仍然缺乏较为良好的方法。本研究原核表达了犬恶丝虫的肌球蛋白轻链（MLC）和小热休克蛋白（sHSP12.6）,并对重组蛋白进行了免疫荧光定位。同时,通过间接ELISA方法评
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犬恶丝虫（Dirofilaria immitis）是呈世界性分布的人兽共患寄生虫,主要危害犬、猫以及犬科和猫科的野生动物。随着全球气候变暖,温带和热带地区犬恶丝虫病的发病率在逐渐增加,严重威胁全球公共卫生安全。目前,该病在诊断方面仍然缺乏较为良好的方法。本研究原核表达了犬恶丝虫的肌球蛋白轻链（MLC）和小热休克蛋白（sHSP12.6）,并对重组蛋白进行了免疫荧光定位。同时,通过间接ELISA方法评价了该重组蛋白的诊断价值,为犬恶丝虫病诊断抗原的筛选奠定了基础。一、犬恶丝虫肌球蛋白轻链基因的原核表达、免疫荧光定位和重组蛋白诊断价值的初步评价寄生虫寄生于宿主体内,在其入侵和移行过程中都需要依靠肌-动球蛋白提供动力。本研究扩增得到犬恶丝虫肌球蛋白的轻链基因,该基因共编码171个氨基酸,通过原核表达得到约35 KDa（含18 KDa His标签）的重组蛋白。免疫印迹试验结果显示,犬恶丝虫肌球蛋白轻链蛋白（r Di-MLC）具有良好的免疫原性和反应原性。间接免疫荧光试验结果显示,Di-MLC主要分布于犬恶丝虫雌虫和雄虫的肌肉,并分泌到肠道中。r Di-MLC为包被抗原建立的ELISA方法试验结果显示,其特异性为44.4%,敏感性为62.5%,表明r Di-MLC不适合作为犬恶丝虫病的候选诊断抗原。二、犬恶丝虫小热休克蛋白基因的原核表达、免疫荧光定位和重组蛋白诊断价值的初步评价HSPs是多肽类蛋白家族,在应激原诱导下,机体高效表达的一类分子伴侣蛋白。本研究扩增得到犬恶丝虫小热休克蛋白基因,该基因共编码114个氨基酸,通过原核表达得到约30 KDa（含18 KDa His标签）的重组蛋白。免疫印迹试验结果显示,犬恶丝虫小热休克蛋白（r Di-sHSP12.6）具有良好的免疫原性和反应原性。间接免疫荧光试验结果显示,Di-sHSP12.6主要分布于犬恶丝虫雌虫和雄虫的表皮层,并分泌到肠道中。r Di-sHSP12.6为包被抗原建立的ELISA方法试验结果显示,其特异性为94.4%,敏感性为91.6%,特异性和敏感性均较高,且交叉反应较低,表明Di-sHSP12.6可作为犬恶丝虫病的候选诊断抗原。
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