【摘 要】
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目的:探讨蒜氨酸对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）所建立损伤模型的保护作用,以及研究这种保护机制所涉及的相关靶点和信号通路。方法:使用MTT试剂盒检测蒜氨酸在不同浓度对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增值活力的影响。建立HUVEC损伤模型:80μg/mLox-LDL诱导HUVEC 24h,借助油红O染色观察细胞损伤情况;采用MTT试剂盒检测不同浓度蒜氨酸对HUVE
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目的:探讨蒜氨酸对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）所建立损伤模型的保护作用,以及研究这种保护机制所涉及的相关靶点和信号通路。方法:使用MTT试剂盒检测蒜氨酸在不同浓度对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增值活力的影响。建立HUVEC损伤模型:80μg/mLox-LDL诱导HUVEC 24h,借助油红O染色观察细胞损伤情况;采用MTT试剂盒检测不同浓度蒜氨酸对HUVEC增值活力的影响;使用乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测细胞上清液中LDH的含量。使用Western blotting检测蒜氨酸对HUVEC损伤模型中caspase 3,BAX表达的影响。使用酶联免疫吸附剂测定（ELISA）检测 IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1、VCAM-1、ICAM-1炎性因子。网络药理学分析蒜氨酸治疗动脉粥样硬化的关键化合物及其作用靶点和通路。测定丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和活性氧（ROS）含量。Western blotting检测关键靶点eNOS蛋白水平。结果:不同浓度的蒜氨酸加入正常的HUVEC细胞培养基中培养24h和48h后不会影响细胞增殖活性。80μg/mL的ox-LDL诱导HUVEC 24h细胞内出现大量红染颗粒,表明HUVEC损伤模型建立成功;与HUVEC损伤模型比较,50～100μg/mL蒜氨酸作用HUVEC损伤模型24h能明显促进HUVEC增值（P＜0.05）;蒜氨酸可显著降低HUVEC损伤模型LDH的表达（P＜0.01）;蒜氨酸能显著下调HUVEC损伤模型中caspase 3,BAX蛋白表达（P＜0.05）,并且能够有效降低HUVEC损伤模型中IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1、VCAM-1、ICAM-1炎性因子水平（P＜0.01）,提示蒜氨酸具有抗炎作用。通过网络药理学分析蒜氨酸抗AS的潜在靶点和邻居靶点,结果发现,eNOS、SIRT1、IL-6等13个网络枢纽节点,提示这些节点可能是蒜氨酸治疗AS的关键靶点。实验证实经过蒜氨酸预处理后,升高损伤细胞内SOD含量,降低细胞培养液中的MDA含量,抑制内皮细胞脂质过氧化和氧化应激损伤,差异具有统计学意义（P＜0.01）。最后通过Western blotting检测蒜氨酸预处理HUVEC后能上调eNOS蛋白的表达（P＜0.05）,符合网络药理学研究结果。结论:蒜氨酸通过上调eNOS蛋白的表达,发挥抗炎和抗氧化的活性,从而保护ox-LDL诱导HUVEC损伤模型。
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