传染性支气管炎病毒(IBV)是引起禽传染性支气管炎(IB)的病原体，给养禽业造成了巨大的经济损失。疫苗的使用是预防IB发生的重要的措施，快速准确的病原和抗体检测是IB临床诊断与疫苗预防效果评估的必要手段。为提高IBV检测的敏感性和特异性，降低检测成本，本文开展了以下研究:　　以嗜肾型IBV SC021202株为研究对象，利用生物信息学分析软件对在不同IBV毒株间广泛保守的膜蛋白（M蛋白）进行分析，结果显示M蛋白氨基端100位氨基酸存在连续跨膜区，而B细胞抗原表位主要分布在羧基端125个氨基酸区域。应用RT-PCR方法获取M蛋白去除氨基端连续跨膜区的截短体片段并连接到原核表达载体pET-28a上，进行诱导表达、蛋白纯化、小鼠免疫和单克隆抗体的制备过程。取免疫小鼠脾脏与骨髓瘤细胞进行融合培养，同时以ELISA和IFA方法筛选阳性细胞培养孔并进行一系列亚克隆，最终筛选出能够稳定分泌特异性识别IBV M蛋白的三株单克隆抗体细胞株，命名为IB1，2B3和6C1。三株单抗的细胞培养上清及小鼠腹水均可与原核和真核表达及病毒粒子中的M蛋白反生特异性反应，腹水的ELISA反应效价均超过1.3×107。IBV M蛋白单克隆抗体的制备为IBV抗原的检测及基础研究提供了良好的工具。　　利用生物信息学软件对IBV SC021202株结构蛋白和非结构蛋白的生物学性质进行预测分析。根据IBV蛋白的优势抗原表位区域，结合参考已鉴定的抗原表位分布情况，同时兼顾蛋白的亲水性、柔韧性、表面可及性及空间折叠情况等性质，选取了覆盖IBV结构蛋白和非结构蛋白的8段优势抗原表位富集区域。应用重叠延伸PCR方法将各个表位串联起来，并在每两个表位片段间加入柔性肽序列(-GGGGS-)，以降低嵌合表位蛋白表达及空间折叠的相互影响，将完整嵌合基因命名为IBV EF，构建在原核表达载体pET-28a上进行诱导表达和蛋白纯化。纯化的EF蛋白可以和IBV阳性血清及EF蛋白免疫血清发生特异性反应，而不与禽类主要病毒如NDV, IBDV, AIV的阳性血清及SPF鸡阴性血清反应，EF蛋白免疫SPF鸡能够刺激鸡体产生IBV特异性抗体。结果显示IBV EF蛋白具有良好的免疫原性和反应原性，能够大量获取且成本较低，有应用到鸡血清中IBV抗体检测的潜力。　　以EF蛋白为包被抗原，经过一系列反应条件的优化，包括蛋白包被浓度，封闭液的选择，抗体稀释液的确定，一抗血清及二抗酶标抗体的最佳稀释倍数、孵育时间，显色时间的优化等，确定了最适反应条件。同时以673份鸡血清为样本将EF ELISA与商品化IDEXX IBV抗体检测试剂盒和间接免疫荧光法(IFA)相比较得出，当阴性和阳性临界S/P值为0.08时，EF ELISA与两种检测方法的阴阳性符合率均较大，此时与IDEXX试剂盒比较阳性符合率为92.4％，阴性符合率为85.9％，总符合率为89.7％;与间接IFA方法比较阳性符合率为88.2％，阴性符合率为99.6％，总符合率为92.2％，确定S/P值0.08为EF ELISA阴阳性临界值。实验结论显示所建立的EF蛋白ELISA血清抗体检测方法具有较好的敏感性和特异性，具有运用到临床血清中IBV抗体的检测。