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目的:在前期研究CD44+鼻咽癌细胞具有类肿瘤干细胞特性,且Bmi-1在其中呈高表达的基础上,研究Bmi-1基因沉默后对人鼻咽癌细胞株CD44+SUNE-15-8F细胞放射敏感性的影响,探索Bmi-1其对潜在的影响机制。 方法:(1)常规培养SUNE-15-8F细胞,并用流式细胞仪定量并分选CD44+细胞;(2)构建Bmi-1-shRNA慢病毒转染CD44+NPC TSC;(3)采用克隆形成试验检测沉默Bmi-1后放射增敏比;(4)RT-PCR和Western bloting检测Bmi-1基因沉默效率和Bmi-1下游调控基因相关蛋白p16、p14和p53表达情况;(5)免疫荧光术检测放射造成DNA双链损伤γ-H2AX焦点情况;(6)流式细胞术检测放疗后凋亡和周期分布情况。 结果:(1)SUNE-15-8F细胞中CD44+的表达所占的比例大约为49.3％(37%—53%);(2)倒置荧光显微镜下可见Bmi-1-shRNA慢病毒载体成功转入CD44+NPC TSC;(3)克隆形成试验检测沉默Bmi-1后放射增敏比1.77;(4)Bmi-1下游调控基因p16、p14和p53在mRNA和蛋白水平表达增加;(5)Bmi-l-shRNA组在接受2Gy放射处理后,细胞内γ-H2AX焦点数目在放射后0.5、6、12及24 h均显著高于对照组,且表现出损伤修复受损;(6)放射后早期凋亡比例增加,Bmi-1沉默延长G1期且显著提高放射诱导的G2/M阻滞。 结论:Bmi-1在CD44+NPC细胞的放射抗拒中发挥保护性作用。沉默Bmi-1基因能显著提高CD44+鼻咽癌类肿瘤干细胞放射的敏感性。Bmi-1可作为提高鼻咽癌类肿瘤干细胞放射敏感性的一有效靶点。