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茶叶中的多种功能物质具有显著的健康促进作用,尤以茶多酚被广泛用于食品、药品生产中。本文以新鲜绿茶为原料,先后进行了茶多酚的浸提、反渗透预浓缩、粗品的纯化以及儿茶素单体的制备工艺探究。具体包括:①采用超声波法,选取主要影响因素包括时间、温度、液料比和超声功率,研究茶多酚浸提的工艺条件;运用响应面法分析影响的主要因素。②利用反渗透设备对绿茶浸提液进行浓缩,在不同温度、操作压力下进行试验,优化浓缩工艺条件。③采用溶剂萃取法对茶多酚提取物进行纯化处理,研究萃取时间、温度及溶剂用量对其得率的影响,并确定最佳工艺条件。④借助制备液相色谱仪,以上述茶多酚粗品为原料,分离制备儿茶素单体。色谱条件:分别以甲醇-水和乙腈-水为流动相;C18色谱柱(SMB100-1010μm,GLP-ID50×450mm填料310g);进样1.2g;流速30mL·min-1;柱温为常温,优化了茶多酚粗品高效液相色谱检测分析条件;并对所获儿茶素单体借助质谱仪进行确证。主要结论如下:(1)选择以水为浸提溶剂,通过单因素和响应面法优化茶多酚浸提试验条件,得出的较优工艺条件为:温度79.93℃,时间24.17min,功率411.36W,液料比21.84mL·g-1。在该条件下,茶多酚得率为19.079%。(2)采用反渗透浓缩方法,绿茶浸提液最适浓缩条件为:温度45℃、操作压力14.0bar。此条件下,膜的平均水通量为5.8L·m-2·s-1,可以去除提取液中3/4的水。(3)三氯甲烷萃取副产物咖啡因的条件为:液料比3:1(溶剂量/mL:提取液量/mL),常温萃取20min。乙酸乙酯萃取茶多酚较优工艺为:液料比2.5,温度10℃,时间24min,优化条件下萃取效率为77.37%,获得的茶多酚粗品,紫外分光度计检测纯度为93.0%。(4)以乙腈-水为流动相,采用梯度洗脱程序:有机相浓度14%(10min),14%-16.5%(63min),16.5%(20min),16.5%-20%-27%,(15min-21min)。获得了表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)和表没食子儿茶素(EGC)和咖啡因,经HPLC检测,EGC纯度97.1%,EGCG纯度99.0%,ECG纯度98.2%,副产物咖啡因纯度93.8%。将收集的各单体经减压浓缩、冷冻干燥后称重,得到179.4mg EGC、428.5mg EGCG、87.3mg ECG。以甲醇为流动相梯度洗脱:有机相浓度18%(10min),18%-19.5%(60min),19.5%(40min),19.5%-50%(30min)。经分析,儿茶素EGCG与副产物咖啡因没有得到完全分离,HPLC检测EGC纯度87.3%,ECG纯度91.6%。将收集的各单体经减压浓缩、冷冻干燥后称重,得到187.6mg EGC;98.5mg ECG。通过高分辨率质谱仪进行鉴定,确认获得的物质为儿茶素单体。