海藻酸钠复合工程化软骨细胞调节Th17/Treg抗兔AIA的机理

来源 :宁波大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yi123400
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:  在海藻酸钠复合工程化软骨细胞对兔佐剂性关节炎的软骨缺损方面有一定疗效并显示一定抗炎作用的基础上,通过研究海藻酸钠支架、工程化软骨细胞及海藻酸钠支架复合工程化软骨细胞各对兔 AIA的抗炎作用及该组织工程学方法抗炎作用分子机制与Th17/Treg细胞平衡的关系,为临床上应用组织工程方法治疗RA提供理论依据并为RA的防治提供新的思路。  方法:  ⑴40只实验用新西兰长耳白兔随机均分为5组(n=8):正常组,佐剂性关节炎模型组,海藻酸钠支架复合工程化软骨细胞治疗组,海藻酸钠支架治疗组,工程化软骨细胞治疗组。  ⑵抽取海藻酸钠支架复合工程化软骨细胞治疗组和工程化软骨细胞治疗组治疗组动物骨髓,用percoll密度梯度分离法提取出骨髓间充质干细胞,体外培养纯化至 P3代后加入诱导剂使其发育成为软骨细胞。  ⑶对模型组及治疗组兔膝关节腔注射完全弗氏佐剂诱导关节炎模型,正常组则注射等量生理盐水作为对照。  ⑷将制备好的海藻酸钠支架,等量的工程化软骨细胞悬液及海藻酸钠支架与工程化软骨细胞混合物三种治疗物回注到相对分组应兔子关节腔内,治疗一个月。正常组及模型组兔膝关节则注入等量生理盐水。  ⑸抽取5组兔子外周血进行ELISA检测Th17和Treg细胞相关细胞因子IL-22、IL-10和TGF-β的表达,RT-PCR检测关节滑膜Th17/Treg细胞相关转录因子RORγtmRNA和Foxp3mRNA表达水平的变化情况,并对关节滑膜进行组织病理学检测。  结果:  ⑴注射完全弗氏佐剂21天后,正常组膝关节未见明显变化,造模实验兔的膝关节红肿,提示佐剂性关节炎模型制备成功。  ⑵自体骨髓经充质干细胞原代培养后形状呈梭形并在培养瓶中增殖后呈涡旋状分布,诱导培养后,梭形细胞向多角形或星形转变,阿利新蓝染成蓝色,标志工程化软骨细胞诱导成功。  ⑶关节滑膜病理学结果显示正常组滑膜未见炎症反应,模型组兔膝关节滑膜出现增生,炎细胞浸润明显,治疗组炎症反应有所减轻,组织工程治疗组抗炎作用最为明显。免疫组化结果显示正常组中 IL-17,IL-22的阳性表达较模型组低(P<0.05),细胞治疗组与支架治疗组与模型组比较无统计学差异,但有降低的趋势,组织工程治疗组下降明显(P<0.05);IL-10在正常组兔膝关节滑膜的表达中高于模型组(P<0.05),细胞治疗组与组织工程治疗组中的表达也较模型组高(P<0.05),支架治疗组与模型组比较无差异(P>0.05);与正常组比较,TGF-β1在模型组中表达较高(P<0.05),细胞治疗组和支架治疗组中 TGF-β阳性结果较模型组有所减少(P<0.05),组织工程治疗组与模型组比较则没有统计学差异(P>0.05)。  ⑷ELISA试剂盒检测兔外周血中TGF-β、IL-10、IL-22的表达水平。结果显示正常组中 TGF-β的表达量远高于模型组(P<0.01),组织工程治疗组较模型组升高明显(P<0.05),细胞治疗组及支架治疗组有所提升但无统计学差异(P>0.05);IL-10、IL-22在正常组及各治疗组中的表达水平较模型组比较无统计学意义(P>0.05)。  ⑸RT-PCR检测各组兔膝关节滑膜中Th17和Treg细胞关键转录因子Foxp3与RORγt的mRNA的表达。结果显示在正常组中 Foxp3 mRNA的相对表达量较模型组高(P<0.05),细胞治疗组及支架治疗组中 Foxp3 mRNA的相对表达量有升高的趋势(P>0.05),组织工程治疗组的相对表达量较模型组高(P<0.05),较正常组低。而滑膜中 RORγt mRNA的表达则相反,在模型组、细胞治疗组及支架治疗组中相对表达量较正常组和组织工程治疗组高。  结论:  ⑴兔外周血中各组IL-10、IL-22的表达水平变化不太明显,TGF-β在正常组高表达,在模型组低表达,在各治疗组均有升高,但只有组织工程治疗组提升显著(P<0.05),提示海藻酸钠支架复合工程化软骨细胞治疗RA可能与TGF-β有关。  ⑵兔关节滑膜中RT-PCR检测Foxp3与RORγt的mRNA的相对表达量及免疫组化检测 TGF-β、IL-10、IL-22、IL-17的阳性表达结果均显示海藻酸钠支架复合工程化软骨细胞治疗 RA有一定抗炎效果,其可能是通过调节滑膜中 Th17细胞和 Treg细胞之间的平衡,进而调控其分泌的细胞因子,达到治疗RA的目的。
其他文献
氯化亚砜是精细化工领域一种重要的无机化工产品,通常为无色或淡黄色透明液体,在医药、农药、染料等行业以及有机合成工业中具有广泛的应用,与其相关的下游产品多达70余种,主要作
BADH(甜菜碱醛脱氢酶)是合成甜菜碱的关键酶,BADH基因受盐诱导表达。本实验室的前期工作发现辽宁碱蓬(Suaeda liaolungensis K.)BADH启动子-300~+62 bp区段具有启动子活性,是
会议
the
金属-有机骨架(MOF)作为拥有新型拓扑结构的新材料,特别是ZIFs类材料,骨架中含有大量氮原子,在作为非均相催化剂载体方面拥有独特优越性,尤其是作为模板构筑多孔纳米复合材料用于电催化研究成为热点。目前应用最多的氧电催化剂是Pt/C和Ru02(orIr02),由于价格昂贵,稳定性差等问题,而无法实现商业化的大规模应用。本论文重点通过调控材料的成分及导电性来提高材料的利用,将其用于电化学催化。已取得
目的:癫痫发作有多种病因,谷氨酸受体兴奋所引起的神经元凋亡是其分子机制之一。海人藻酸受体作为癫痫相关度较高的离子型兴奋性谷氨酸受体的一种引起了广泛的注意。KA刺激诱导
该文初步研究了免疫调节剂-肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumomiae,简称Kp)荚膜糖蛋白粗产品的制备方法与工艺条件.该产品经初步检测,具有与进口药物必思添相当的免疫活性.该
会议
该论文用不同方法制备出具有不同结构特征的石墨粉并对石墨粉进行了热处理、化学处理和化学镀铜改性处理,较为全面地研究了各种石墨粉用作锂离子电池负极材料的性能.同时讨论