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空肠弯曲菌(C.jejuni)和结肠弯曲菌(C.coli)是重要的食源性病原菌和人畜共患病原菌,可导致雏鸡、仔猪、绵羊等流产,还可以通过食物链传播给人,导致人的急性胃肠炎及神经性疾病格林-巴利综合征。近年来,抗菌药物被广泛应用于畜禽养殖中,导致我国畜禽源弯曲菌的耐药情况日益严重,耐药弯曲菌的产生及传播将会对人类健康造成巨大威胁。因此开展畜禽源弯曲菌耐药机制研究对保障公共卫生安全具有重要意义。
本研究于2018-2019年在河南省屠宰场禽源及猪源样本中分离得到136株弯曲菌(C.jejuni,85株;C.coli,51株),禽源分离率为32.78%(C.jejuni,28.14%;C.coli,4.6%);猪源弯曲菌分离率为19.17%(C.coli,19.17%)禽源弯曲菌以C.jejuni为主,猪源弯曲菌均为C.coli。采用琼脂稀释法测定了其对临床常用7种抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC),结果表明,上述弯曲菌对四环素耐药率最高(C.jejuni,67株,78.82%;C.coli,50株,47.05%)。MLST分子分型结果表明,C.jejuni与C.coliST型多样,主要流行克隆型分别为ST429与ST10077。
已有研究表明,弯曲菌对四环素类抗生素耐药表型主要由核糖体保护蛋白Tet(O)和外排泵CmeABC或RE-CmeABC共同介导。本研究在具有高水平四环素耐药表型的弯曲菌中发现了Tet(L)变异体,其编码基因与葡萄球菌中tet(L)基因高度同源,仅发生了7bp碱基突变,3bp缺失。将tet(L)变异体克隆至C.jejuni标准菌株NCTC11168得到转化子11168-tet(L)变异体,11168-tet(L)变异体对四环素和多西环素的耐药水平分别增加了16倍和8倍;此外,该tet(L)变异体还可介导大肠杆菌对替加环素的耐药水平升高4倍。全基因组测序分析表明tet(L)变异体位于tet(L)variant-IS1216E-ORF1-fexA-Δtnp-IS1216E-tet(O)-tnpV-repA耐药基因岛,该耐药基因岛整合于染色体保守基因potB中。MLST和自然转化试验证实tet(L)变异体可发生克隆扩散和水平传播。
已有研究表明,弯曲菌对林可酰胺类抗菌药物耐药表型是由与其他抗菌药物交叉耐药导致,如erm(B)及cfr(C)基因。本研究在弯曲菌中发现了lnu(C)基因,该基因编码修饰林可酰胺类抗菌药物的腺苷化酶。将lnu(C)基因克隆至弯曲菌标准菌株NCTC11168中,转化子11168-lnu(C)与受体菌株NCTC11168相比,对林可霉素的耐药水平升高32倍,表明lnu(C)可介导弯曲菌对林可酰胺类抗菌药物耐药;通过自然转化证实该基因可在弯曲菌中发生水平传播。对lnu(C)基因遗传背景进行分析,发现来源于GeneBank数据库的19株弯曲菌与本研究检测到的11株lnu(C)阳性弯曲菌基因环境多样。
综上所述,本研究对136株畜禽源弯曲菌进行耐药性监测和分子分型分析;发现了可介导弯曲菌对四环素类药物耐药新机制-外排泵Tet(L)变异体;在弯曲菌中发现林可酰胺类抗菌药物腺苷化酶的编码基因lnu(C)。上述研究结果阐明了弯曲菌耐药新机制,为弯曲菌耐药性的防控提供了科学依据。
本研究于2018-2019年在河南省屠宰场禽源及猪源样本中分离得到136株弯曲菌(C.jejuni,85株;C.coli,51株),禽源分离率为32.78%(C.jejuni,28.14%;C.coli,4.6%);猪源弯曲菌分离率为19.17%(C.coli,19.17%)禽源弯曲菌以C.jejuni为主,猪源弯曲菌均为C.coli。采用琼脂稀释法测定了其对临床常用7种抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC),结果表明,上述弯曲菌对四环素耐药率最高(C.jejuni,67株,78.82%;C.coli,50株,47.05%)。MLST分子分型结果表明,C.jejuni与C.coliST型多样,主要流行克隆型分别为ST429与ST10077。
已有研究表明,弯曲菌对四环素类抗生素耐药表型主要由核糖体保护蛋白Tet(O)和外排泵CmeABC或RE-CmeABC共同介导。本研究在具有高水平四环素耐药表型的弯曲菌中发现了Tet(L)变异体,其编码基因与葡萄球菌中tet(L)基因高度同源,仅发生了7bp碱基突变,3bp缺失。将tet(L)变异体克隆至C.jejuni标准菌株NCTC11168得到转化子11168-tet(L)变异体,11168-tet(L)变异体对四环素和多西环素的耐药水平分别增加了16倍和8倍;此外,该tet(L)变异体还可介导大肠杆菌对替加环素的耐药水平升高4倍。全基因组测序分析表明tet(L)变异体位于tet(L)variant-IS1216E-ORF1-fexA-Δtnp-IS1216E-tet(O)-tnpV-repA耐药基因岛,该耐药基因岛整合于染色体保守基因potB中。MLST和自然转化试验证实tet(L)变异体可发生克隆扩散和水平传播。
已有研究表明,弯曲菌对林可酰胺类抗菌药物耐药表型是由与其他抗菌药物交叉耐药导致,如erm(B)及cfr(C)基因。本研究在弯曲菌中发现了lnu(C)基因,该基因编码修饰林可酰胺类抗菌药物的腺苷化酶。将lnu(C)基因克隆至弯曲菌标准菌株NCTC11168中,转化子11168-lnu(C)与受体菌株NCTC11168相比,对林可霉素的耐药水平升高32倍,表明lnu(C)可介导弯曲菌对林可酰胺类抗菌药物耐药;通过自然转化证实该基因可在弯曲菌中发生水平传播。对lnu(C)基因遗传背景进行分析,发现来源于GeneBank数据库的19株弯曲菌与本研究检测到的11株lnu(C)阳性弯曲菌基因环境多样。
综上所述,本研究对136株畜禽源弯曲菌进行耐药性监测和分子分型分析;发现了可介导弯曲菌对四环素类药物耐药新机制-外排泵Tet(L)变异体;在弯曲菌中发现林可酰胺类抗菌药物腺苷化酶的编码基因lnu(C)。上述研究结果阐明了弯曲菌耐药新机制,为弯曲菌耐药性的防控提供了科学依据。