【摘 要】
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戊型肝炎病毒（hepatitis E virus,HEV）是引起戊型肝炎（hepatitis E,HE）的病原体。HEV既能感染人也能感染动物,已知猪等动物是HEV的自然宿主,一些动物HEV能跨物种传播,从而使人类感染。HEV的自然传播途径为粪-口,感染HEV的人和动物主要经粪便排出病毒。随着社会经济水平的提高,养殖业发展迅速,养殖场数量逐年增加,产生大量畜牧粪便,家畜粪便中HEV对环境污染情况,
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戊型肝炎病毒（hepatitis E virus,HEV）是引起戊型肝炎（hepatitis E,HE）的病原体。HEV既能感染人也能感染动物,已知猪等动物是HEV的自然宿主,一些动物HEV能跨物种传播,从而使人类感染。HEV的自然传播途径为粪-口,感染HEV的人和动物主要经粪便排出病毒。随着社会经济水平的提高,养殖业发展迅速,养殖场数量逐年增加,产生大量畜牧粪便,家畜粪便中HEV对环境污染情况,以及通过环境污染向人类传播的危险性目前还不清楚。本研究对河北省家畜粪便HEV排出情况及家畜粪便HEV对环境的污染状况进行调查,并探究目前河北省畜牧粪便的处理方法能否有效灭活HEV,从而为切断病毒传播途径和制定预防策略提供参考。（1）从河北省不同地区的家畜饲养场、饲养场周边堆粪区域和田地中采集猪、兔、牛、羊等动物的粪便样本,从靠近养殖场、粪堆及农田的水沟、坑塘和河流采集水样本。将样本进行预处理后,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测HEV抗原（HEV-Ag）,应用反转录巢式聚合酶链式反应（RT-Nested PCR）检测HEV-RNA,利用实时荧光定量PCR（FQ-PCR）对HEV-RNA阳性样本定量,并对RT-Nested PCR阳性样本进行病毒基因序列测定,应用MEGA10.0进行HEV的基因比对和基因进化分析。从河北省5个地区的家畜饲养场采集猪粪便样本163份,HEV-Ag和HEV-RNA的平均阳性率分别为19.02%和15.34%,HEV-RNA浓度在1.86×10~4～3.55×10~7copies/g之间;从4个地区的养兔场采集兔粪便387份,HEV-Ag和HEV-RNA的平均阳性率分别为21.71%和14.34%,HEV-RNA浓度在1.58×10~4～7.08×10~6copies/g之间;从不同地区的家畜饲养场采集牛、羊粪便182份,HEV-Ag的平均阳性率分别为0.55%和2.68%,HEV-RNA均未检出。从饲养场外的环境中采集粪便样本141份,HEV-Ag和HEV-RNA的平均阳性率分别为24.11%和7.09%,HEV-RNA浓度在1.29×10~4～4.90×10~6copies/g之间;采集环境水样本247份,HEV-Ag平均阳性率为8.91%,HEV-RNA未检出。对检出的HEV-RNA阳性样本的PCR产物进行基因比对和基因进化分析后发现所有来源于猪粪便的HEV型别为4型（HEV-4）,所有兔粪便的HEV型别为3型兔HEV（HEV-3ra）。（2）为了解河北省家畜粪便处理方式,共走访调查不同地区的35家饲养场,其中有25家（71.43%）饲养场采用堆积发酵法处理粪便,显示农村家畜粪便的主要处理方式为堆积发酵法,通常堆积1-3个月后用于施肥。为了解堆积发酵法对粪便中HEV的清除情况,本研究模拟粪便堆肥过程,测定HEV随堆放时间的变化。选取家畜粪便HEV-Ag和HEV-RNA均检测为阳性的样本,混合称重分装,在实验室中设定4℃、20℃和37℃三种温度与干燥、湿润两种湿度存放粪便,分别在存放3天、5天、7天、15天、20、60天和90天时测定粪便中的HEV-Ag和HEV-RNA。结果显示:4℃湿润条件下HEV存在时间最长,HEV-RNA持续阳性超过20天,最长可持续存在90天;而在37℃干燥条件下,粪便存放当天HEV-RNA已不能检出,可见粪便在低温、湿润的情况下HEV能持续存在较长时间。同样在污水样本中加入定量的HEV病毒,4℃条件下HEV-RNA持续存在时间最长可达7～15天,37℃条件下未检出;粪肥和水样本中,HEV-Ag持续时间均长于HEV-RNA。本研究结果表明河北省家畜特别是家猪和家兔的粪便中确有HEV排出,牛和羊是否感染和排出HEV还需要进一步的调查研究;养殖场外环境中堆放的粪肥中检出HEV,表明环境中存在HEV的污染;经基因序列分析确认环境样本检测到的HEV-RNA属于HEV-4和HEV-3ra,表明猪粪便和家兔粪便是环境HEV污染的主要来源。在粪便模拟实验中发现在适宜条件下HEV-Ag和HEV-RNA可在粪肥中存在较长时间,提示目前我省常采用的粪肥处理方式无法保证其中的HEV完全灭活,畜牧粪肥露天堆放及施肥过程中可能使HEV污染环境。家畜粪便通过环境污染感染人的风险性值得进一步研究。
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