膀胱癌BIU-87细胞耐药株与敏感株间的P-糖蛋白转移

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目的P-糖蛋白是一类能量依赖性的转运蛋白,能将许多结构不同的抗肿瘤药物逆向转运出细胞,是导致肿瘤化疗失败的主要原因。本研究主要探讨膀胱癌细胞BIU-87耐药株与敏感株间是否存在功能性P一糖蛋白(P-gp)的转移及P-gp与多药耐药基因(mdrl)的关系。方法流式细胞检测分别检测BIU-87和BIU-87/ADM细胞的P-gp表达水平,将Hoechst33342染色BIU-87敏感株(BIU-87/Hoechst33342),并与BIU-87耐药株(BIU-87/ADM)通过Transwell系统共培养,激光共聚焦显微镜观察细胞间P-gp的转移。收集共培养体系下室的BIU-87/Hoechst33342细胞(BIU-87/aqMDR),采用western blot分析BIU-87/ADM、BIU-87/aqMDR、BIU-87/Hoechst33342、BIU-87细胞P-gp表达水平,同时应用RT-PCR分析这些细胞mdr1mRNA的表达水平。采用流式细胞术测BIU-87/ADM、BIU-87/aqMDR、BIU-87细胞罗丹明123外排功能。结果荧光显微镜下大量呈蓝色荧光细胞。激光共聚焦显微镜下BIU-87/aqMDR以核呈蓝色荧光为主,胞浆和胞膜呈较弱的绿色荧光,BIU-87/ADM细胞呈强绿色荧光,BIU-87/Hoechst33342细胞核呈蓝色荧光。Western blot检测结果显示,BIU-87/aqMDR细胞中P-gp表达水平低于BIU-87/ADM,但明显高于BIU-87/Hoechst33342(P<0.05)与BIU-87(P<0.05)。RT-PCR结果显示,BIU-87/ADM细胞中mdr1mRNA表达水平较高,而BIU-87/aqMDR、BIU-87/Hoechst33342及BIU-87三种细胞mdr1的mRNA表达水平差异没有统计学意义(P>0.05)。罗丹明123外排实验显示,BIU-87/aqMDR细胞内荧光强度高于BIU-87/ADM组(P<0.05),而低于BIU-87组(P<0.05)。结论P-gp可以由耐药膀胱癌细胞转移至敏感膀胱癌细胞,且这种获得性P—gp具有药物外排功能,这一现象为进一步探讨膀胱癌的多药耐药性机制提供了新的思路。
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