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研究背景与目的:炎症性肠病(IBD)是一种累及胃肠道的特发性的肠道慢性炎症性疾病,主要包括克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)。其病因不完全明确,主要认为与环境改变、遗传易感性、肠道菌群失调、免疫功能异常密切相关。近几年的研究显示适应性免疫反应尤其是CD4+T细胞在IBD发病机制中发挥重要作用。Cdc42是小分子GTP结合蛋白Rho家族的成员,与GTP结合呈活化状态参与信号转导,与GDP结合呈非活化状态,与肿瘤细胞的黏附迁移相关,在淋巴发育过程中影响淋巴细胞的生存、增殖、分化参与淋巴细胞的阳性选择和成熟。在前期工作中,我们已经通过双向凝胶电泳和免疫印迹法检测发现,UC患者结肠黏膜中,Cdc42水平较正常人显著升高,同时p38、Cdc42上调。在研究二者相互关系时发现,脂多糖激活小鼠巨噬细胞RAW264.7中p38MAPK通路的同时也上调了 Cdc42的表达;而p38特异性抑制剂SB203580则在抑制p38MAPK通路的同时下调Cdc42。Cdc42的活性程度与p38相关。基于前期的研究成果,我们设想Cdc42通过影响CD4+T辅助细胞参与IBD的发病机制。研究方法:1.DSS造模,流式检测小鼠脾脏、肠系膜淋巴结中CD4+T细胞群的比例及qPCR检测Cdc42在脾脏及淋巴结中的RNA表达情况,Western blot检测Cdc42在脾脏及淋巴结中的蛋白表达情况,HE染色观察肠道炎症,免疫组化观察Cdc42肠道细胞分布及表达情况。2.CD4+T细胞体外诱导分化观察抑制Cdc42功能对CD4+T细胞群分化的影响及其可能机制,流式检测Th17、Th1、Th2、Treg细胞比例,Western blot检测各细胞群特异转录因子蛋白表达水平变化。3.DSS小鼠抑制剂抑制Cdc42功能后,流式检测CD4+T细胞群变化,HE检测肠道炎症情况。4.统计分析:数据采用SPSS17.0软件进行统计学分析:常规进行方差齐性检验及正态性检验。计量资料采用均数±标准差表示,条带图采用Gelpro软件进行灰度值分析,采集计量数据资料后也表示为均数±标准差方式进行方差齐性检验。方差齐性时统计比较采用One-way ANOVA检验,组间多重比较采用LSD-t检验;方差不齐时采用近似方差分析法Welch法或Kruskal-Wallis检验,组间多重比较采用DunnettT3检验;基线水平不一致时采用协方差分析,方差不齐时采用变量变换后再进行协方差分析;诱导后细胞各指标采用Two-wayANOVA分析;P<0.05表示差异显著,有统计学意义。研究结果:1.DSS组与空白组相比脾脏及肠系膜淋巴结中Th17、Th1细胞比例增高,Th2、Treg细胞无明显变化;2.DSS小鼠与正常小鼠相比,脾脏和淋巴结Cdc42 mRNA水平下降,蛋白表达增高;3.抑制Cdc42对CD4+T细胞的增殖及凋亡无影响;4.抑制Cdc42功能促进Th17、Th1、Th2、Treg细胞群的分化,且促进Th17细胞向病理性Th17细胞分化;5.抑制Cdc42功能可促进DSS小鼠肠道炎症加重;6.抑制Cdc42功能,DSS小鼠肠系膜淋巴结中Th17、Th1细胞群比例增加,对Th2、Treg无明显影响;7.抑制Cdc42功能,DSS小鼠脾脏中Th17、Th1、Th2、Treg无明显变化;研究结论:Cdc42在DSS小鼠免疫器官中RNA表达水平下降,蛋白表达水平升高;抑制Cdc42功能可能通过促进CD4+T辅助细胞分化加重炎症性肠病肠炎症状,因此Cdc42可能对炎症性肠病的疾病进展具有一定程度的抑制作用。