研究目的:Runx2是在成骨细胞分化及牙齿发育过程中发挥着重要作用的转录因子。Runx2缺陷会导致包括牙齿发育异常在内的全身硬组织疾病,如锁骨颅骨发育不全综合征(cleidocranial dysplasia,CCD)。Runx2基因突变可表现出严重的骨及牙齿发育障碍。研究发现Runx2基因敲除可以导致牙釉质矿化障碍,然而Runx2调控牙釉质发育的的作用机制还不完全清楚。研究表明人的C4orf26基因突变可导致严重牙釉质磨耗。本文的研究目的:(1)检测C4orf26在小鼠釉质发育过程中的时一空表达特征;(2)以构建的条件性Runx2基因敲除小鼠为实验研究模型,进一步探讨Runx2在小鼠成釉细胞中调控牙釉质发育的作用机制。研究方法:(1)收集小鼠PN10时期的下颌磨牙区,采用实时荧光定量PCR,检测Runx2loxp/loxp小鼠和K14-cre,Runx2loxp/loxp小鼠成釉细胞釉质基质蛋白表达量的改变。(2)收集PN10时期C57BL/6小鼠的下颌磨牙区、心脏、肝脏、肺、脑、眼睛和骨等组织,采用RT-PCR检测C4orf26在小鼠不同器官中的表达;(3)PN7、PN10和PN14时期的Runx2loxy/loxp小鼠为研究模型,通过免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)检测C4orf26蛋白在小鼠成釉细胞不同发育时期的表达特征,并进行观察和分析,再用此技术检测C4orf26蛋白在成釉细胞Runx2基因敲除小鼠(K14-cre,Runx2loxp/loxp)的表达改变。研究结果:(1)实时荧光定量PCR结果显示:与Runx2loxy/loxp小鼠相比,在PN10时期K14-cre,Runx2loxp/loxp小鼠中 Amelx,Ambn,Enam基因 mRNA 的表达量显著上调,Amtn,Odam,Scpppq1及C4orf26的表达量显著下调,其中对C4orf26的影响最显著。(2)RT-PCR检测结果发现C4orf26仅在牙齿组织中有表达。(3)免疫组化结果显示:C4orf26在成釉细胞中表达并定位于成釉细胞远端,在PN7和PN10时期Runx2loxp/loxp小鼠第一磨牙的牙尖部位,C4orf26在成釉细胞染色呈强阳性,在PN14天,C4orf26在成釉细胞中表达渐弱;在K14-cre,Runx2loxploxp/oxp小鼠成釉细胞,与野生型小鼠相比,C4orf26在相同部位着色稍弱。结论:(1)与野生型小鼠相比较,当Runx2-cKO小鼠成釉细胞中Amelx、Ambn、Enam、Amtn、Odam、Scpppql及C4orf26都出现不同程度的变化,其中Runx2缺失对C4orf26的影响最显著。(2)C4orf26基因大量表达于成熟期成釉细胞的基底膜,提示C4orf26可能参与牙釉质矿化期成釉细胞与釉质之间的物质交换。(3)成釉细胞Runx2基因缺失后,C4orf26在成釉细胞基膜表达减弱,说明Runx2基因缺失引起的釉质矿化障碍可能与C4orf26的基因表达有密切关系。