OsbHLH116在水稻生长发育中的作用研究

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Osb HLH116是b HLH类转录因子,且存在于水稻休眠的主效QTL q SD12区间。在水稻生长发育中的功能还被验证。通过Osb HLH116转基因植株研究,发现其在种子休眠与叶片衰老中具有重要的作用。结果如下:1、Osb HLH116进化树分析发现,进化关系较近且被研究报道的是拟南芥中光敏色素互作因子PIF1和PIF4。亚细胞定位表明Osb HLH116蛋白主要在细胞核表达。2、RNAi籽粒萌发显著慢于野生型,用ABA、GA3、PAC处理种子萌发,RNAi萌发缓慢并没有恢复。在水稻中干涉Osb HLH116表达,导致籽粒萌发延迟。利用Osb HLH116 CRISPR/Cas9突变种子进行萌发试验,突变体种子萌发慢于野生型。充分说明水稻转录因子Osb HLH116具有促进种子萌发的作用。Osb HLH116 RNAi籽粒在发育过程中ABA积累始终低于野生型。萌发前时野生型籽粒中Osb HLH116基因表达量高于RNAi材料,而开始萌发时,表达量低于RNAi材料,吸涨过程中Osb HLH116发挥重要作用。干涉Osb HLH116表达后ABA合成基因表达量升高,ABA代谢基因表达量也有升高。而GA合成基因Os GA20ox1表达水平降低。结果证明,Os HLH116通过ABA和GA相互作用促进种子萌发。3、水稻中Osb HLH116过表达导致叶片衰老,过表达植株叶片中超氧阴离子(O2-)和过氧化氢(H2O2)和抗氧化保护酶(POD)均显著高于野生型。NBT染色证明,从拔节期至生育后期,过表达植株中O2-的积累始终高于野生型。且通过HPLC测试叶片中激素含量,发现过表达植株叶片中ABA、GA和JA含量均高于野生型。表达谱测序发现,在死亡的细胞组织中积累PBZ1可以作为标记基因表达量显著升高,过氧化氢酶CATA表达量显著升高,CATC表达量降低。能同时抑制糊粉细胞ABA和GA信号途径的WRKY24抑制转录因子表达量降低,负调控BR信号的Os REM4.1表达量显著降低,负调控生长素合成转运的SAUR39表达量显著降低,说明Osb HLH116通过调控这些基因参与叶片衰老。表明Osb HLH116通过激素及ROS积累促进叶片衰老。综上所述,Osb HLH116通过ABA、GA信号途径调控种子萌发,通过ROS、细胞死亡基因和多种激素促进植株叶片衰老。
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