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马尾松毛虫质型多角体病毒（Dendrolimus punctatus cypovirus，DpCPV）是世界森林害虫——马尾松毛虫的重要病原物。其宿主域广泛，大约能感染鳞翅目10个科35种昆虫。DpCPV特异性感染松毛虫的中肠上皮细胞，在宿主体内可以持续很长时间，在中国该病毒已于2010年被登记为商品化的杀虫剂用于松毛虫的防治。尽管目前已经完成了对DpCPV全基因组的测序分析工作，但由于缺乏可以定量CPV感染的细胞系，对CPV的蛋白功能及其感染机制的研究还很少。普遍认为，病毒粒子表面的突起蛋白在受体识别和入侵感染过程中起重要作用，本研究探索了DpCPV的突起蛋白VP3，VP4，VP5在病毒吸附感染过程中的作用，其中VP3根据其结构分为GTase(1-366aa)和MTase(406-1058aa)两个片段，经鉴定MTase和VP4蛋白在DpCPV的感染过程中均发挥吸附蛋白的功能并且发现家蚕碱性磷酸酶蛋白(alkaline phosphatase protein，ALP)是MTase的配体。 本论文共分为三个章节。 第一章:综述了DpCPV的研究现状及病毒入侵感染宿主细胞的策略，主要介绍了DpCPV的分类命名，病毒粒子的结构，基因组编码蛋白的功能以及CPV感染的症状和特征等;简单介绍了呼肠孤科病毒入侵感染的研究进展、病毒受体的功能和研究方法等，并且阐述了本论文的研究内容和意义。 第二章:DpCPV吸附蛋白的鉴定。本研究用敏感宿主的中肠刷状缘膜囊(midgut brush border membrane vesicles，BBMV)蛋白替代了敏感宿主细胞，通过ELISA免疫吸附实验证明了DpCPV病毒粒子可以吸附到甜菜夜蛾BBMV上。为了鉴定在吸附过程中起关键作用的病毒蛋白，分别检测了DpCPV突起蛋白GTase，MTase，VP4和VP5对甜菜夜蛾BBMV的吸附情况，结果发现GTase，MTase，VP4可以有效的吸附到BBMV上，而VP5的吸附率则较低。竞争吸附实验结果表明，MTase和VP4蛋白均可以与DpCPV病毒粒子竞争吸附到BBMV上。进一步的抗体中和实验表明，anti-MTase、anti-VP4的多克隆抗体可以有效的抑制病毒对BBMV的吸附，并且anti-MTase和anti-VP4的混合抗体比单独的anti-MTase、anti-VP4抗体抑制病毒吸附的效率更高。综合以上结果，推测DpCPV的MTase（B-spike）和VP4（A-spike）蛋白均参与了病毒吸附宿主细胞的过程，并在这一过程中发挥病毒吸附蛋白的功能。 第三章:筛选与DpCPV MTase(B-spike)和VP4（A-spike）蛋白相互作用的宿主中肠膜蛋白。本实验采用Far-western blotting方法鉴定与MTase和VP4相互作用的宿主分子，结果显示家蚕BBMV上一个分子量约65kDa的蛋白可以特异性的结合MTase蛋白，经质谱分析鉴定此蛋白为家蚕GPI锚定的碱性磷酸酶蛋白(alkaline phosphatase protein，ALP)。然而相同条件下未能检测到BBMV蛋白上VP4的结合蛋白。在体外通过免疫共沉淀(Co-IP)实验验证了MTase蛋白和家蚕ALP之间的相互作用。此外，用anti-ALP的多克隆抗体封闭家蚕BBMV或者用原核表达的家蚕ALP蛋白中和DpCPV病毒粒子后，均可明显抑制DpCPV病毒粒子对家蚕BBMV的吸附。进一步的虫体中和实验证实家蚕ALP蛋白可以有效中和DpCPV病毒粒子对甜菜夜蛾的感染，但其他的宿主因子也可能与病毒的感染相关。本研究说明DpCPV MTase(B-spike)通过与家蚕中肠的ALP蛋白的相互作用介导与宿主的结合，两者的相互作用可以影响DpCPV的感染。