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近年来的成果表明转录因子叉头框家族在恶性肿瘤发病机制的研究中受到重视。转录因子叉头框蛋白P4（forkhead box protein 4,FOXP4）属于叉头框家族的一员,目前许多针对FOXP4的研究发现其在多种肿瘤中表达上调,说明FOXP4可能参与恶性肿瘤的发生发展。但其在贲门腺癌（Gastric cardia adenocarcinoma,GCA）中的作用及机制尚未见报道。长链非编码RNA（long non-coding RNAs,lnc RNAs）是存在于人类骨骼和转录组中一类重要的调控细胞分子,近年来的科学研究结果表明lnc RNAs的异常表达与多种恶性肿瘤密切地息息相关,而且FOXP4-AS1基因对于恶性上消化道癌中的调控机制以及与FOXP4基因的关系没有得到报道。本课题研究首先通过检测FOXP4及FOXP4-AS1基因对胃癌细胞系和贲门腺癌组织中的表达情况,进一步建立敲低和过表达质粒探究其对胃癌细胞系体外增殖、迁移及侵袭能力的影响以及其对胃癌细胞系上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响。主要研究内容及结果如下:第一部分转录因子FOXP4与长链非编码RNA FOXP4-AS1在胃癌细胞系及贲门腺癌组织中的表达及相关性目的:分别研究胃癌细胞系及贲门腺癌组织中长链非编码RNA FOXP4-AS1以及转录因子FOXP4基因的表达及相关性,并分析与临床病理参数之间的关系。方法:1.检测4株胃癌细胞系（BGC-823、SGC-7901、MGC-803和HGC-27）中FOXP4及FOXP4-AS1基因的表达情况,采用实时荧光定量反转录多聚核苷酸酶链式反应（Quantitative real-time reverse tran（?）scription polymerase chain reaction,qRT-PCR）的方法。2.应用qRT-PCR法检测在50例贲门腺癌及其相对应的癌旁正常组织中FOXP4及FOXP4-AS1基因的表达情况及相关性,并结合临床病理参数进行统计学分析。结果:1.胃癌细胞系中FOXP4基因的表达情况:qRT-PCR实验结果显示,FOXP4基因在4株胃癌细胞系中均为高表达（P<0.05）,且在SGC-7901细胞中表达水平最高。2.贲门腺癌组织及相应癌旁正常组织中FOXP4基因的m RNA表达情况:FOXP4基因的m RNA在贲门腺癌组织中表达上调（P<0.05）,并与分期和转移密切相关（P<0.01）。3.胃癌细胞系中FOXP4-AS1基因的表达情况:qRT-PCR实验结果显示,FOXP4-AS1基因在4株胃癌细胞系中均为高表达（P<0.05或P<0.01）,且在BGC-823细胞中表达水平最高。4.贲门腺癌及其相应癌旁正常组织中FOXP4-AS1基因的表达情况:FOXP4基因的m RNA在贲门腺癌组织中表达上调（P<0.05）,并与分期和转移密切相关（P<0.01）。5.贲门腺癌组织中FOXP4-AS1与FOXP4基因的m RNA表达相关性:在贲门腺癌组织中FOXP4-AS1与FOXP4基因的m RNA表达之间无明显的相关性（P>0.05）。第二部分转录因子FOXP4基因对胃癌细胞生物学特性的影响及机制研究目的:研究敲低及过表达转录因子FOXP4基因后对胃癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法:1.设计并合成si-FOXP4,转染胃癌细胞SGC-7901,并验证其转染效率。2.合成过表达质粒pc DNA3.1-FOXP4并根据说明书转染胃癌细胞SGC-7901,并验证其转染效率。3.MTS实验分别检测敲低及过表达FOXP4基因对SGC-7901细胞增殖能力的影响,并绘制生长曲线。4.划痕实验分别检测敲低及过表达FOXP4基因对SGC-7901细胞迁移能力的影响。5.Transwell小室侵袭实验分别检测敲低及过表达FOXP4基因对SGC-7901细胞侵袭能力的影响。6.qRT-PCR法检测EMT相关因子（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、β-catenin、Twist、ZEB1、MMP2及MMP9）m RNA表达水平在敲低及过表达FOXP4基因后的不同。8.Western blot实验检测EMT相关因子（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及β-catenin）蛋白表达水平在敲低及过表达FOXP4基因后的不同。结果:1.敲低FOXP4基因的效率验证:成功设计si RNA si-FOXP4并将si-FOXP4转染胃癌细胞SGC-7901,通过qRT-PCR法分析发现,敲低组FOXP4基因的表达显著低于对照组（P<0.01）。2.过表达FOXP4基因的效率验证:成功构建过表达载体pc DNA3.1-FOXP4并转染胃癌细胞SGC-7901,通过qRT-PCR法分析发现,过表达FOXP4基因后SGC-7901细胞中FOXP4的表达显著升高（P<0.01）。3.MTS实验结果表明,敲低FOXP4基因可明显抑制胃癌细胞SGC-7901的体外增殖能力,而过表达FOXP4基因的作用则与之相反（P<0.05或P<0.01）。4.划痕实验结果表明,敲低FOXP4基因可明显抑制胃癌细胞SGC-7901的体外迁移能力,而过表达FOXP4基因的作用则与之相反。（P<0.05或P<0.01）。5.Transwell小室侵袭实验结果表明,敲低FOXP4基因可明显抑制胃癌细胞SGC-7901的体外侵袭能力,而过表达FOXP4基因的作用则与之相反。（P<0.05或P<0.01）。6.qRT-PCR结果显示,在SGC-7901细胞中,敲低FOXP4基因后,E-cadherin的m RNA表达水平升高（P<0.01）,N-cadherin、Vimentin、Twist、β-catenin及MMP9的m RNA表达水平降低（P<0.05或P<0.01）。过表达FOXP4基因后E-cadherin的m RNA表达水平降低（P<0.01）,N-cadherin、Vimentin、Twist、β-catenin及MMP9的m RNA表达水平升高（P<0.05或P<0.01）。7.FOXP4基因对部分EMT相关因子蛋白表达水平的影响:Western blot实验结果表明,在SGC-7901细胞中,敲低FOXP4基因后,E-cadherin的蛋白表达水平升高,N-cadherin、Vimentin、Twist和β-catenin的蛋白表达水平降低。而过表达FOXP4基因后,E-cadherin的蛋白表达水平降低,N-cadherin、Vimentin和β-catenin的蛋白表达水平升高。第三部分长链非编码RNA FOXP4-AS1基因对胃癌细胞生物学特性的影响及机究探究目的:研究敲低及过表达长链非编码RNA FOXP4-AS1基因对胃癌细胞生物学特性的影响及作用机制的初步探究。方法:1.设计并合成sh-FOXP4-AS1,转染胃癌细胞系SGC-7901及BGC-823,并验证转染效率。2.构建过表达体pc DNA3.1-FOXP4-AS1并转染胃癌细胞SGC-7901及BGC-823,通过qRT-PCR法验证转染效率。3.MTS实验分别检测敲低及过表达FOXP4基因对SGC-7901细胞增殖能力的影响,并绘制生长曲线。4.划痕实验分别检测敲低及过表达FOXP4基因对SGC-7901细胞迁移能力的影响。5.Transwell小室侵袭实验分别检测敲低及过表达FOXP4基因对SGC-7901细胞侵袭能力的影响。6.qRT-PCR法检测敲低及过表达FOXP4-AS1基因对部分EMT相关因子（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、β-catenin、Twist、ZEB1、MMP9、MMP2）m RNA表达的影响。7.Western blot实验检测敲低及过表达FOXP4-AS1基因对部分EMT相关因子（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、β-catenin）蛋白表达的影响。结果:1.FOXP4-AS1 sh RNA质粒的筛选与敲低效率的验证:成功构建敲低FOXP4-AS1基因的SGC-7901细胞及BGC-823细胞,qRT-PCR的分析结果如下,sh1-FOXP4-AS1转染组细胞FOXP4-AS1基因的相对表达量低于sh-NC转染组及空白对照组,差异具有统计学意义（P<0.01）。2.过表达质粒pc DNA3.1-FOXP4-AS1的构建及转染效率的验证:成功构建过表达FOXP4-AS1的SGC-7901及BGC-823细胞株,通过qRT-PCR法分析发现,过表达组FOXP4-AS1基因的相对表达量显著升高（P<0.01）。3.MTS实验结果表明,敲低FOXP4-AS1基因可明显抑制胃癌细胞SGC-7901及BGC-823的体外增殖能力,而过表达FOXP4-AS1基因的作用则与之相反（P<0.05或P<0.01）。4.划痕实验结果表明,敲低FOXP4-AS1基因可明显抑制胃癌细胞SGC-7901及BGC-823的体外迁移能力,而过表达FOXP4-AS1基因的作用则与之相反。（P<0.05或P<0.01）。5.Transwell小室侵袭实验结果表明,敲低FOXP4-AS1基因可明显抑制胃癌细胞SGC-7901及BGC-823的体外侵袭能力,而过表达FOXP4-AS1基因的作用则与之相反。（P<0.05或P<0.01）。6.qRT-PCR结果显示,在SGC-7901细胞及BGC-823细胞中,敲低FOXP4-AS1基因后,E-cadherin的m RNA表达水平升高（P<0.01）,N-cadherin、Vimentin、Twist、MMP9和β-catenin的m RNA表达水平降低（P<0.05或P<0.01）。过表达FOXP4-AS1基因后E-cadherin的m RNA表达水平降低（P<0.01）,N-cadherin、Vimentin、Twist、MMP9和β-catenin的m RNA表达水平升高（P<0.05或P<0.01）。7 Western blot实验结果表明,在SGC-7901细胞及BGC-823细胞中,敲低FOXP4-AS1基因后,E-cadherin的蛋白表达水平升高,N-cadherin、Vimentin和β-catenin的蛋白表达水平降低。而过表达FOXP4-AS1基因后,E-cadherin的蛋白表达水平降低,N-cadherin、Vimentin和β-catenin的蛋白表达水平升高。结论:1.长链非编码RNA FOXP4-AS1和转录因子FOXP4基因在胃癌细胞和贲门腺癌组织中表达较高,并与贲门腺癌患者的临床病理资料密切相关。2.FOXP4基因可以影响胃癌细胞的体外恶性生物学行为,FOXP4基因促进胃癌细胞的侵袭和转移能力可能是通过EMT途径实现。3.FOXP4-AS1基因可以影响胃癌细胞的体外恶性生物学行为,FOXP4-AS1基因促进胃癌细胞的侵袭和转移能力可能是通过EMT途径实现。