表皮生长因子受体EGFR（epidermal growth factor receptor,EGFR）是肿瘤小分子抑制剂研究领域的重要靶标之一。本文基于课题组前期化合物库,以EGFR高表达肿瘤细胞株为研究对象,开展化合物对细胞株的抑制活性评估,并分析其在蛋白水平对EGFR表达水平的影响,以期探讨先导化合物对EGFR激酶活性及其对下游通路的影响,为探究先导化合物的作用机制以及新型靶向EGFR的抗肿瘤抑制剂的研发提供思路。本文的研究内容主要围绕如下展开:采用MTT法测定课题组内前期设计合成的两个系列化合物对EGFR高表达细胞株肺癌细胞A549、前列腺癌细胞PC-3和肝癌细胞Hep G2、SMMC-7721的细胞增殖影响,并测定其对EGFR表达较弱的人类髓性白血病细胞K562的增殖影响,进一步测定活性较好化合物对小鼠正常肾细胞NRK-52E的毒性。研究结果表明,以吉非替尼为先导分子衍生的C系列化合物,对A549和PC-3细胞表现出较好的活性;以索拉菲尼为先导分子衍生得到的WQ系列化合物,对A549、PC-3、SMMC-7721和K562细胞均表现出较好抑制活性。对正常细胞NRK-52E的细胞活力测试结果表明,C系列中C-19和WQ系列中W-18对正常细胞活力影响较小;通过平板克隆形成实验研究不同浓度的化合物对单个细胞增殖能力的影响,研究结果发现,经过不同浓度C-19和W-18处理24 h后的A549和PC-3细胞,随着作用浓度增高,细胞集落形成依次降低;通过细胞划痕实验证明C系列中C-19和WQ系列中W-18对EGFR高表达细胞株A549、PC-3的迁移能力有明显影响;分析Hoechst 33258染色结果可知,当A549细胞和PC-3细胞与不同浓度C-19和W-18作用24 h后,细胞开始出现核固缩,随着浓度增高,出现细胞胞质浓缩、细胞胞体缩小,并随着浓度增高现象变得越来越明显,高浓度下还能观察到致密浓染;进一步应用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染法分析发现,随着浓度升高,细胞凋亡率增大,且在低浓度细胞也有明显凋亡;ELISA双抗夹心法评价化合物体外EGFR激酶表达抑制活性结果显示,W-18对A549和PC-3两个细胞株的抑制活性优于对照药,C-19也表现出较好的活性;分析Western blot结果可得,C-19与W-18都能下调p-EGFR（Tyr1068）以及EGFR的表达;同时能下调下游信号通路中关键蛋白AKT以及p-AKT（Ser473）的表达;最后SYBYL-X 2.0软件模拟预测结果显示,化合物C-19与EGFR^wt以及EGFR^T790M/L858R都能通过氢键连接有较好的结合能力,而化合物W-18与EGFR^wt结合评分较低,可能是由于氢键作用较少,但与EGFR^T790M/L858R氢键作用增强,从而增强结合能力。通过本课题研究证实,化合物C-19和W-18对几种肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭都有较强的抑制活性,且对EGFR高表达细胞株A549和PC-3更具选择性。能够通过作用于EGFR下游PI3K/Akt,而影响EGFR激酶活性及表达,从而引起细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的生命活动。