目的肝纤维化(liver fibrosis，LF)为各种慢性肝疾患所导致的一系列损伤-修复，最终肝组织内细胞外基质(Extracellular Matrix，ECM)过度沉积的反应。由于发生的机制比较复杂，至今对肝纤维化的了解还很有限，因此制约了肝纤维化治疗的发展。肝星状细胞(Hepatic Stellate cell，HSC)作为ECM的主要生成细胞，被认为是各种肝脏损伤引起肝纤维化的中心环节。在肝纤维化的发生发展机制中，对肝星状细胞激活的启动、维持，细胞外基质也起着重要的作用。HSC与ECM之间存在着复杂的相互作用，而其相互作用主要经整合素介导。黏着斑激酶(focal adhesion kinase，FAK)是整合素信号途径中连接整合素与下游信号分子的媒介，是胞内多个信号途径的交汇点。其中，以FAK为中心的整合素信号转导通路主要是Ras-MAPK途径，细胞外信号调节激酶1／2(extracellularsignal-regulated kinase，ERK1／2)是MAPK家族中研究最为清楚的成员，其通路Ras-RAF-MEK-ERK参与细胞多种活动。抗纤软肝颗粒组方在临床上有良好的疗效，现将其制成适应临床需要的颗粒剂。在既往研究的基础上，应用体外细胞培养技术，从肝星状细胞与细胞外基质的相互作用着手，以整合素、FAK、ERK1／2为研究切入点，研究抗纤软肝颗粒对肝星状细胞整合素信号通路的影响，由此阐释抗纤软肝颗粒抗肝星状细胞增殖与诱导凋亡的作用机制。方法：(1)首先根据处方中丹参、莪术及鳖甲所含化学成分的理化性质及其药理作用，以提取丹参酮ⅡA和莪术挥发油为目的，确定抗纤软肝颗粒的制备制成工艺，用正交设计的直观分析优化几种辅料的用量确定最终的制剂处方。(2)考察成品的体外溶出度；同时对之进行全面的质量控制研究，制定质量标准。(3)运用体外细胞培养技术，以HSC-T6细胞系为研究对象，分为空白包被＋10％生理盐水血清组、FN包被＋10％生理盐水血清组、FN包被＋5％kxr组、FN包被＋10％kxr组、FN包被＋20％kxr组。按以上分组进行药物干预，各组FN(3μg／ml)均于kxr加入前30分钟加入，干预后继续培养48h。(4)采用MTT法测细胞增殖，采用甲苯胺蓝染色方法测定细胞黏附率；Annexin V-PE／7-ADD法测定Hsc凋亡。(5)应用免疫细胞组织化学方法检测HSC整合素α5β1蛋白的表达。(6)应用免疫细胞组织化学方法检测HSC FAK蛋白的表达，采用RT-PCR法测定FAKmRNA的表达。(7)应用免疫细胞组织化学方法检测HSC ERK1蛋白的表达，采用RT-PCR法测定ERK1mRNA的表达。结果：(1)丹参的渗漉最佳工艺为：用90％的乙醇进行渗漉，流速为0.6ml／min，乙醇用量为12倍，浸泡时间为16h；鳖甲超微粉碎后置显微镜下观察，可见粒径小于5um的多于50％，粒径小于10um的多于90％；莪术挥发油的最佳提取工艺为加水8倍，浸泡时间为0.5h，煎煮5h。莪术挥发油的最佳包合工艺为挥发油：β-CD(1∶4)，搅拌时间为60min，包合温度为50℃，以10000r／min的转速进行包合。制备工艺中确定以糊精为辅料，药物：糊精：1∶0.5，以50％乙醇为润湿剂，加入0.4％倍CMC作为助悬剂，过16目筛制粒，50℃干燥，10目筛整粒。(2)含量测定方法学考察实验中，其回收率合格，精密度、稳定性和重现性良好，说明了所制定的含量测定方法的合理性和可行性；样品在考察期各项指标无明显变化，均符合规定。(3)与FN组比较，kxr各组均可以抑制HSC增殖，存在显著差异(P＜0.01)，kxr各组均可以诱导HSC凋亡，与FN组及空白对照组比较存在显著差异(P＜0.01)，与空白对照组比较，kxr各组均可以抑制FN与HSC的粘附，存在显著差异(P＜0.01)。(4)抗纤软肝颗粒含药血清组HSC的整合素α5β1蛋白表达显著下调，与空白对照组及FN组相比有显著性差异(P＜0.01) (5)抗纤软肝颗粒含药血清组HSC的FAKmRNA、蛋白表达均显著下调，分别减少了43.32％(11.93％)，56.52％(39.52％)，70.27％(53.42％)，与对照组及FN组相比，KXR1组(p＜0.05)，KXR2组、KXR3组(p＜0.01)，均有显著性差异。(6)抗纤软肝颗粒含药血清组HSC的ERK1mRNA、蛋白表达均显著下调，分别减少了39.53％(8.93％)，47.45％(35.62％)，56.78％(50.12％)，与对照组及FN组相比，KXR1组(p＜0.05)，KXR2组、KXR3组(p＜0.01)，均有显著性差异。结论(1)所确定的制备工艺稳定可行，质量控制方法合理可行。(2) FN能够刺激HSC增殖，由此可知细胞外基质通过整合素介导对肝星状细胞激活的启动、维持起着重要的作用。实验发现，抗纤软肝颗粒含药血清可以抑制由FN刺激的HSC增殖，并诱导HSC凋亡，并能抑制HSC的粘附，呈剂量依赖关系。抗纤软肝颗粒能够下调HSC整合素α5β1的表达，能够在转录及翻译水平抑制FAK及ERK1mRNA、蛋白的表达。(3)抗纤软肝颗粒含药血清有较好的抑制HSC增殖，并诱导HSC凋亡的作用，可能是通过以下途径实现的：抑制或拮抗了细胞外基质与其受体整合素的结合，从而抑制细胞外基质与HSC的粘附；通过下调整合素蛋白的表达，降低下游信号分子FAK及ERK1mRNA、蛋白的表达，阻抑了整合素激活的FAK信号途径中的Ras依赖的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径，即Ras-RAF-MEK-ERK通路。这可能是其抗肝纤维化的作用靶点之一。