【摘 要】
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有研究发现糖胺聚糖(GAG)的硫酸化模式在细胞培养中对神经元突起形成和神经元极化起重要作用。其中硫酸软骨素6(chondroitin-6-sulfate，C6S)的硫酸基团位于GAG的6-O位置，通过前期实验我们发现C6S对小脑神经元的轴突生长起抑制性作用。我们认为C6S结合肽有望通过阻断C6S的功能，促进脊髓损伤后的轴突再生及功能恢复。本课题主要通过细胞存活实验、神经元轴突生长实验，组织免疫荧光
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有研究发现糖胺聚糖(GAG)的硫酸化模式在细胞培养中对神经元突起形成和神经元极化起重要作用。其中硫酸软骨素6(chondroitin-6-sulfate，C6S)的硫酸基团位于GAG的6-O位置，通过前期实验我们发现C6S对小脑神经元的轴突生长起抑制性作用。我们认为C6S结合肽有望通过阻断C6S的功能，促进脊髓损伤后的轴突再生及功能恢复。本课题主要通过细胞存活实验、神经元轴突生长实验，组织免疫荧光，免疫印迹实验(Western Blot)及动物行为学实验筛选出能在体内外阻断C6S抑制功能的C6S结合肽，评价其对小鼠脊髓损伤恢复的效果，并研究其相关信号通路。体外轴突生长实验中，我们测试了7个高亲和力C6S结合肽，筛选出3个在体外能拮抗C6S轴突生长抑制作用的结合肽。在体内实验中，我们构建脊髓损伤小鼠模型，将筛选出的3个C6S结合肽溶液浸泡入可吸收明胶片并直接贴于损伤部位，并评价治疗效果。结果发现，在脊髓损伤后将P3和P5结合肽应用于损伤部位，能缩短脊髓损伤后恢复所需要的时间(小鼠脊髓损伤后应用C6S结合肽经过4周功能得到恢复)。进一步研究表明P3和P5结合肽通过抑制C6S介导的RhoA/ROCK和PI3K-Akt-mTOR信号通路诱导脊髓受损区域的轴突再生和髓鞘重髓鞘化，并能使星形胶质细胞和小胶质/巨噬细胞的活化减少，抑制纤维胶质瘢痕的形成及减少损伤部位的卵磷脂和纤维连接蛋白的表达。综上所述，这些结果表明损伤早期给予C6S结合肽P3、P5治疗可以改善小鼠脊髓损伤区域的胶质增生，促进轴突再生和功能恢复。
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