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研究背景
胶质瘤是中枢神经系统中最主要的一种原发性肿瘤，具有侵袭性高、难治愈和致死率高等特性。由于恶性胶质瘤手术难度大，难以完全切除，胶质瘤容易复发且预后不佳，中位生存率仅为12个月。胶质瘤细胞的生长速度快、侵袭能力强是胶质瘤易于复发、难以根治的重要原因。其中，上皮间质转化(Epithelial mesenchymal transition, EMT)所导致肿瘤细胞的侵袭能力增强是胶质瘤术后复发的原因之一。另外，胶质瘤细胞与脑组织细胞外基质(ECM)发生了特殊的相互作用，也可直接诱导神经胶质瘤细胞的侵袭。随着医疗技术的进步，胶质瘤的治疗取得一些进展，但手术及放化疗仍然是主要手段，治疗效果并不显著，这也导致患者复发率较高。尽快找到胶质瘤发生发展的内外在机制，开发出新的治疗方法，对于胶质瘤的治疗至关重要。因此，阐明神经胶质瘤增殖快和高侵袭转移能力的分子机制，将有助于找到治疗胶质瘤的新靶点，从而改善胶质瘤患者的预后。
硫酸软骨素(CS)是由D-葡萄糖醛酸(GLCA)和N-乙酰-D-氨基半乳糖(Galnac)组成的重复二糖的糖胺聚糖，在人体的脑、软骨、肌键、韧带等组织中都大量存在。硫酸化是由不同的软骨素硫转移酶(chondroitin sulfotransferases，CHSTs)所介导，是硫酸软骨素的主要修饰方式之一。硫酸化通常添加在N-乙酰-D-氨基半乳糖的C-4和/或C-6和/或GLCA的C-2上。硫酸化位置导致存在多种不同形式的CS：CS-A，CS-C，CS-D，CS-E。这种硫酸化也赋予CS不同的作用，并且能够选择性的与不同分子发生相互作用。从上世纪60年代开始深入研究以来，人们已发现CS具有多种生理和病理活性，具体表现在具有调脂、降脂、抗血栓和抗动脉粥样硬化，抗关节炎，促进成骨细胞增生和诱导新骨形成等作用；有研究发现CS在多种类型的肿瘤中均有表达，如纤维肉瘤，黑色素瘤和脑肿瘤等。不同的硫酸化位点导致其作用不同，其中有促进肿瘤发展，也有起到抑制肿瘤的作用。在中枢神经系统中最常见的CS亚型为C4S和C6S，主要由软骨素硫转移酶11(CHST11)催化生成CS-A(C4S)；软骨素硫转移酶3(CHST3)催化生成CS-C。目前，关于C4S和C6S在胶质瘤中表达、功能及其机制的尚不清楚，本课题旨在检测不同病理级别的胶质瘤中C4S和C6S的表达水平，阐明胶质瘤中C4S和C6S与胶质瘤分级关系。同时研究C4S和6.C4S和C6S处理U251和U-87MG后，用WB和免疫荧光检测EMT相关蛋白E-cadherin，
C6S对细胞增殖、迁移和侵袭影响及其作用的分子机制，从而为胶质瘤治疗提供相应策略。
目的
1.探讨C4S和C6S在人胶质瘤组织和正常脑组织的表达情况。
2.分析C4S和C6S的表达与胶质瘤患者临床病理分级的相关性。
3.探讨外源性C4S和C6S对人胶质瘤细胞系U251、U-87MG增殖，迁移侵袭的影响。
4.研究抑制CHST11和CHST3基因对人脑胶质瘤细胞系U251、U-87MG增殖、迁移和侵袭的影响。
5.探讨C4S和C6S对胶质瘤细胞金属蛋白酶MMP-2和MMP-9，胶质瘤细胞EMT的影响及可能的信号机制。
6.研究IGFBP5在胶质瘤中的表达，功能及可能的分子机制。
7.体内实验检测4S和C6S对胶质瘤细胞生长和侵袭的影响。
方法
1.选用人胶质瘤组织芯片，使用免疫组织化学技术检测C4S和C6S在胶质瘤中的表达情况，并分析在各级别胶质瘤中的表达水平和关系。
2.采用CCK-8实验检测外源性C4S和C6S处理U251和U-87MG胶质瘤细胞后细胞的增殖能力变化。
3.采用划痕实验检测C4S和C6S处理U251和U-87MG后细胞迁移能力的变化。
4.采用Transwell实验检测C4S和C6S处理U251和U-87MG后细胞迁移及侵袭能力的变化。
5.采用克隆形成实验检测C4S和C6S处理U251和U-87MG后细胞形成克隆能力的变化。
6.C4S和C6S处理U251和U-87MG后，用WB和免疫荧光检测EMT相关蛋白E-cadherin，fibronectin,N-cadherin,Vimentin等表达情况。
7.用WB检测C4S和C6S处理U251和U-87MG后金属蛋白酶MMP-9和MMP-2的表达情况。
8.用WB检测C4S和C6S处理U251和U-87MG细胞后p-AKT的表达情况。
9.用WB检测给予PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002预处理细胞，后联合C4S或C6S，胶质瘤细胞的EMT相关蛋白表达，MMP2蛋白的变化情况。
10.用Transwell实验检测给予PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002预处理，在联合C4S或C6S处理细胞后，细胞迁移侵袭能力的变化。
11.采用RNA干扰技术，将细胞分别转染对照组si-NC，干扰组si-RNA(si-CHST11和si-CHST3)，用qPCR技术检测CHST11和CHST3的mRNA表达水平。
12.干扰CHST11和CHST3后，采用划痕实验检测U251和U-87MG细胞迁移能力的变化；采用Transwell实验检测U251和U-87MG细胞迁移侵袭能力的变化。
13.干扰CHST11和CHST3后，用WB和免疫荧光检测EMT相关蛋白E-cadherin,Fibronectin,Ncadherin,Vimentin及MMP-9,MMP-2,p-AKT的表达情况。
14.用qPCR和WB进一步鉴定C4S和C6S处理或干扰CHST11和CHST3后，下游基因IGFBP5的表达变化；
15.干扰IGFBP5后，用WB和qPCR检测干扰效果；用划痕实验，Transwell实验检测细胞迁移侵袭能力的改变。
16.给予PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002预处理细胞，后联合C4S或C6S，用WB检测IGFBP5蛋白的变化情况。
17.用C4S和C6S处理细胞，同时干扰IGFBP5基因的表达，用Transwell实验检测U251和U-87MG细胞迁移侵袭能力的变化。
18.采用斑马鱼肿瘤模型，研究C4S和C6S对胶质瘤细胞在体内生长及侵袭的影响。
结果
1.C4S和C6S主要表达在细胞间质中，免疫组化阳性信号为浅红色、深红色。C4S在脑胶质瘤组织的表达率为93.6%(88/94)，C6S在胶质瘤组织中的表达率为91.5%(86/94)；在9例正常脑组织中C4S和C6S均呈低表达。C4S在I级胶质瘤高达率为6.7%(1/15)，II级胶质瘤高表达率为15.0%(3/20)、III-IV级胶质瘤高表达率分别为76.3%(45/59)，差异显著，具有统计学意义(p＜0.01)(见表1)。C6S在I级胶质瘤高表达率为6.7%(1/15)，II级胶质瘤高表达率为10.0%(2/20)、III-IV级胶质瘤高表达率分别为79.7%(47/59)。C4S和C6S表达随病理级别增高有逐渐升高的趋势，说明C4S和C6S表达与胶质瘤的恶性程度相关。
2.C4S和C6S处理细胞后，CCK-8增殖实验结果显示C4S和C6S能够一定程度的促进细胞增殖。划痕实验及Transwell实验显示C4S和C6S能够显著促进细胞的迁移和侵袭能力。
3.C4S和C6S处理U251和U-87MG后，WB结果显示p-AKT显著升高，金属蛋白酶MMP-9，MMP-2表达显著升高；E-cadherin显著降低，Fibronectin，N-cadherin，Vimentin表达显著升高。
4.CCK-8增殖实验结果显示干扰CHST11和CHST3基因能够一定程度的抑制细胞增殖。
5.沉默CHST11和CHST3基因后，划痕实验结果显示，干扰CHST11和CHST3组划痕之间的距离明显大于对照组；Transwell细胞迁移侵袭实验同样显示，干扰CHST11和CHST3能够显著降低细胞迁移和侵袭数。
6.干扰CHST11和CHST3基因后，WB结果显示p-AKT显著降低，金属蛋白酶MMP-9，MMP-2表达显著降低；EMT相关蛋白E-cadherin显著增加，Fibronectin，N-cadherin，Vimentin表达显著减少。
7.使用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002处理U251和U-87MG细胞1小时后，再加入C4S或C6S，WB结果显示单独用C4S或C6S处理细胞，p-AKT、Fibronectin、N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9表达显著升高，E-cadherin降低；C4S或C6S联合LY294002同时处理细胞，WB结果显示LY294002能够显著抑制C4S和C6S诱导的EMT转化和MMP2蛋白升高的作用，说明C4S和C6S调控胶质瘤细胞EMT转化和MMP2的表达是通过PI3K/AKT通路来发挥作用的。
8.Transwell细胞迁移侵袭实验显示，LY294002能够抑制C4S或C6S对细胞迁移侵袭的促进作用。
9.通过在线数据库分析发现IGFBP5的mRNA在胶质瘤中的表达高于正常对照组，且低表达IGFBP5的患者生存率显著高于高表达IGFBP5的患者。免疫组化结果显示IGFBP5在胶质瘤组织中的表达显著高于正常脑组织的表达水平。
10.C4S和C6S处理U251和U-87MG，WB和qPCR结果显示IGFBP5mRNA和蛋白表达水平明显升高。
11.干扰CHST11和CHST3后，WB和qPCR结果显示IGFBP5蛋白和mRNA表达水平明显降低。
12.干扰U251和U-87MG细胞中IGFBP5表达后，划痕实验显示干扰IGFBP5后，细胞划痕愈合能力显著降低；Transwell迁移侵袭实验结果显示干扰IGFBP5后，细胞的迁移侵袭能力显著降低。
13.用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002处理U251和U-87MG细胞1小时后，再加入C4S或C6S，WB结果显示单独用C4S或C6S处理细胞，p-AKT和IGFBP5蛋白表达显著升高；C4S或C6S联合LY294002同时处理细胞，WB结果显示LY294002能够显著抑制C4S和C6S对IGFBP5蛋白的促进作用，说明C4S和C6S调控IGFBP5的表达是通过PI3K/AKT通路来发挥作用的。
14.使用C4S或C6S处理细胞，同时干扰IGFBP5的表达，Transwell转移侵袭实验结果显示C4S和C6S是通过IGFBP5来调控胶质瘤细胞细胞的迁移侵袭能力。
15.C4S和C6S处理U251和U-87MG后，将细胞显微注射到斑马鱼受精48小时后胚胎卵黄囊，3天后发现经C4S和C6S处理后的胶质瘤细胞生长和侵袭能力显著高于对照组细胞。
16.把干扰CHST11和CHST3的U251和U-87MG细胞显微注射到斑马鱼受精48小时后胚胎卵黄囊中，3天后发现干扰CHST11和CHST3后的细胞生长和侵袭能力显著低于对照组细胞。
17.C4S和C6S处理带红色荧光标记的U251后，将细胞显微注射到斑马鱼受精48小时后胚胎脑内，3天后发现C4S和C6S处理后的细胞生长和侵袭能力显著高于对照组细胞。
结论
1.与正常脑组织相比，C4S和C6S在人脑胶质瘤组织中的表达明显升高，并且随着肿瘤的分级表达水平显著升高。
2.外源性的C4S及C6S一定程度能够促进细胞的增殖；体外结果显示C4S和C6S能够显著促进胶质瘤细胞的迁移侵袭能力。抑制C4S和C6S能够抑制细胞的増殖、迁移及侵袭能力，表明C4S和C6S可促进胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力。
3.C4S和C6S通过PI3K/AKT信号通路促进胶质瘤细胞的EMT转化和MMP-2表达，进而进一步影响胶质瘤细胞迁移和侵袭的能力。
4.C4S和C6S能够促进IGFBP5的表达，干扰CHST11和CHST3能够抑制IGFBP5的表达。沉默IGFBP5能够抑制胶质瘤细胞的迁移侵袭能力。
5.C4S和C6S可通过PI3K/AKT信号通路调控IGFBP5的表达，影响胶质瘤细胞的迁移和侵袭能力。
6.体内实验结果显示C4S和C6S能够显著促进胶质瘤细胞在斑马鱼脑内及胚胎内的生长和侵袭能力；干扰CHST11和CHST3能够显著抑制胶质瘤细胞在斑马鱼胚胎内的生长和侵袭能力。
胶质瘤是中枢神经系统中最主要的一种原发性肿瘤，具有侵袭性高、难治愈和致死率高等特性。由于恶性胶质瘤手术难度大，难以完全切除，胶质瘤容易复发且预后不佳，中位生存率仅为12个月。胶质瘤细胞的生长速度快、侵袭能力强是胶质瘤易于复发、难以根治的重要原因。其中，上皮间质转化(Epithelial mesenchymal transition, EMT)所导致肿瘤细胞的侵袭能力增强是胶质瘤术后复发的原因之一。另外，胶质瘤细胞与脑组织细胞外基质(ECM)发生了特殊的相互作用，也可直接诱导神经胶质瘤细胞的侵袭。随着医疗技术的进步，胶质瘤的治疗取得一些进展，但手术及放化疗仍然是主要手段，治疗效果并不显著，这也导致患者复发率较高。尽快找到胶质瘤发生发展的内外在机制，开发出新的治疗方法，对于胶质瘤的治疗至关重要。因此，阐明神经胶质瘤增殖快和高侵袭转移能力的分子机制，将有助于找到治疗胶质瘤的新靶点，从而改善胶质瘤患者的预后。
硫酸软骨素(CS)是由D-葡萄糖醛酸(GLCA)和N-乙酰-D-氨基半乳糖(Galnac)组成的重复二糖的糖胺聚糖，在人体的脑、软骨、肌键、韧带等组织中都大量存在。硫酸化是由不同的软骨素硫转移酶(chondroitin sulfotransferases，CHSTs)所介导，是硫酸软骨素的主要修饰方式之一。硫酸化通常添加在N-乙酰-D-氨基半乳糖的C-4和/或C-6和/或GLCA的C-2上。硫酸化位置导致存在多种不同形式的CS：CS-A，CS-C，CS-D，CS-E。这种硫酸化也赋予CS不同的作用，并且能够选择性的与不同分子发生相互作用。从上世纪60年代开始深入研究以来，人们已发现CS具有多种生理和病理活性，具体表现在具有调脂、降脂、抗血栓和抗动脉粥样硬化，抗关节炎，促进成骨细胞增生和诱导新骨形成等作用；有研究发现CS在多种类型的肿瘤中均有表达，如纤维肉瘤，黑色素瘤和脑肿瘤等。不同的硫酸化位点导致其作用不同，其中有促进肿瘤发展，也有起到抑制肿瘤的作用。在中枢神经系统中最常见的CS亚型为C4S和C6S，主要由软骨素硫转移酶11(CHST11)催化生成CS-A(C4S)；软骨素硫转移酶3(CHST3)催化生成CS-C。目前，关于C4S和C6S在胶质瘤中表达、功能及其机制的尚不清楚，本课题旨在检测不同病理级别的胶质瘤中C4S和C6S的表达水平，阐明胶质瘤中C4S和C6S与胶质瘤分级关系。同时研究C4S和6.C4S和C6S处理U251和U-87MG后，用WB和免疫荧光检测EMT相关蛋白E-cadherin，
C6S对细胞增殖、迁移和侵袭影响及其作用的分子机制，从而为胶质瘤治疗提供相应策略。
目的
1.探讨C4S和C6S在人胶质瘤组织和正常脑组织的表达情况。
2.分析C4S和C6S的表达与胶质瘤患者临床病理分级的相关性。
3.探讨外源性C4S和C6S对人胶质瘤细胞系U251、U-87MG增殖，迁移侵袭的影响。
4.研究抑制CHST11和CHST3基因对人脑胶质瘤细胞系U251、U-87MG增殖、迁移和侵袭的影响。
5.探讨C4S和C6S对胶质瘤细胞金属蛋白酶MMP-2和MMP-9，胶质瘤细胞EMT的影响及可能的信号机制。
6.研究IGFBP5在胶质瘤中的表达，功能及可能的分子机制。
7.体内实验检测4S和C6S对胶质瘤细胞生长和侵袭的影响。
方法
1.选用人胶质瘤组织芯片，使用免疫组织化学技术检测C4S和C6S在胶质瘤中的表达情况，并分析在各级别胶质瘤中的表达水平和关系。
2.采用CCK-8实验检测外源性C4S和C6S处理U251和U-87MG胶质瘤细胞后细胞的增殖能力变化。
3.采用划痕实验检测C4S和C6S处理U251和U-87MG后细胞迁移能力的变化。
4.采用Transwell实验检测C4S和C6S处理U251和U-87MG后细胞迁移及侵袭能力的变化。
5.采用克隆形成实验检测C4S和C6S处理U251和U-87MG后细胞形成克隆能力的变化。
6.C4S和C6S处理U251和U-87MG后，用WB和免疫荧光检测EMT相关蛋白E-cadherin，fibronectin,N-cadherin,Vimentin等表达情况。
7.用WB检测C4S和C6S处理U251和U-87MG后金属蛋白酶MMP-9和MMP-2的表达情况。
8.用WB检测C4S和C6S处理U251和U-87MG细胞后p-AKT的表达情况。
9.用WB检测给予PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002预处理细胞，后联合C4S或C6S，胶质瘤细胞的EMT相关蛋白表达，MMP2蛋白的变化情况。
10.用Transwell实验检测给予PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002预处理，在联合C4S或C6S处理细胞后，细胞迁移侵袭能力的变化。
11.采用RNA干扰技术，将细胞分别转染对照组si-NC，干扰组si-RNA(si-CHST11和si-CHST3)，用qPCR技术检测CHST11和CHST3的mRNA表达水平。
12.干扰CHST11和CHST3后，采用划痕实验检测U251和U-87MG细胞迁移能力的变化；采用Transwell实验检测U251和U-87MG细胞迁移侵袭能力的变化。
13.干扰CHST11和CHST3后，用WB和免疫荧光检测EMT相关蛋白E-cadherin,Fibronectin,Ncadherin,Vimentin及MMP-9,MMP-2,p-AKT的表达情况。
14.用qPCR和WB进一步鉴定C4S和C6S处理或干扰CHST11和CHST3后，下游基因IGFBP5的表达变化；
15.干扰IGFBP5后，用WB和qPCR检测干扰效果；用划痕实验，Transwell实验检测细胞迁移侵袭能力的改变。
16.给予PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002预处理细胞，后联合C4S或C6S，用WB检测IGFBP5蛋白的变化情况。
17.用C4S和C6S处理细胞，同时干扰IGFBP5基因的表达，用Transwell实验检测U251和U-87MG细胞迁移侵袭能力的变化。
18.采用斑马鱼肿瘤模型，研究C4S和C6S对胶质瘤细胞在体内生长及侵袭的影响。
结果
1.C4S和C6S主要表达在细胞间质中，免疫组化阳性信号为浅红色、深红色。C4S在脑胶质瘤组织的表达率为93.6%(88/94)，C6S在胶质瘤组织中的表达率为91.5%(86/94)；在9例正常脑组织中C4S和C6S均呈低表达。C4S在I级胶质瘤高达率为6.7%(1/15)，II级胶质瘤高表达率为15.0%(3/20)、III-IV级胶质瘤高表达率分别为76.3%(45/59)，差异显著，具有统计学意义(p＜0.01)(见表1)。C6S在I级胶质瘤高表达率为6.7%(1/15)，II级胶质瘤高表达率为10.0%(2/20)、III-IV级胶质瘤高表达率分别为79.7%(47/59)。C4S和C6S表达随病理级别增高有逐渐升高的趋势，说明C4S和C6S表达与胶质瘤的恶性程度相关。
2.C4S和C6S处理细胞后，CCK-8增殖实验结果显示C4S和C6S能够一定程度的促进细胞增殖。划痕实验及Transwell实验显示C4S和C6S能够显著促进细胞的迁移和侵袭能力。
3.C4S和C6S处理U251和U-87MG后，WB结果显示p-AKT显著升高，金属蛋白酶MMP-9，MMP-2表达显著升高；E-cadherin显著降低，Fibronectin，N-cadherin，Vimentin表达显著升高。
4.CCK-8增殖实验结果显示干扰CHST11和CHST3基因能够一定程度的抑制细胞增殖。
5.沉默CHST11和CHST3基因后，划痕实验结果显示，干扰CHST11和CHST3组划痕之间的距离明显大于对照组；Transwell细胞迁移侵袭实验同样显示，干扰CHST11和CHST3能够显著降低细胞迁移和侵袭数。
6.干扰CHST11和CHST3基因后，WB结果显示p-AKT显著降低，金属蛋白酶MMP-9，MMP-2表达显著降低；EMT相关蛋白E-cadherin显著增加，Fibronectin，N-cadherin，Vimentin表达显著减少。
7.使用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002处理U251和U-87MG细胞1小时后，再加入C4S或C6S，WB结果显示单独用C4S或C6S处理细胞，p-AKT、Fibronectin、N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9表达显著升高，E-cadherin降低；C4S或C6S联合LY294002同时处理细胞，WB结果显示LY294002能够显著抑制C4S和C6S诱导的EMT转化和MMP2蛋白升高的作用，说明C4S和C6S调控胶质瘤细胞EMT转化和MMP2的表达是通过PI3K/AKT通路来发挥作用的。
8.Transwell细胞迁移侵袭实验显示，LY294002能够抑制C4S或C6S对细胞迁移侵袭的促进作用。
9.通过在线数据库分析发现IGFBP5的mRNA在胶质瘤中的表达高于正常对照组，且低表达IGFBP5的患者生存率显著高于高表达IGFBP5的患者。免疫组化结果显示IGFBP5在胶质瘤组织中的表达显著高于正常脑组织的表达水平。
10.C4S和C6S处理U251和U-87MG，WB和qPCR结果显示IGFBP5mRNA和蛋白表达水平明显升高。
11.干扰CHST11和CHST3后，WB和qPCR结果显示IGFBP5蛋白和mRNA表达水平明显降低。
12.干扰U251和U-87MG细胞中IGFBP5表达后，划痕实验显示干扰IGFBP5后，细胞划痕愈合能力显著降低；Transwell迁移侵袭实验结果显示干扰IGFBP5后，细胞的迁移侵袭能力显著降低。
13.用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002处理U251和U-87MG细胞1小时后，再加入C4S或C6S，WB结果显示单独用C4S或C6S处理细胞，p-AKT和IGFBP5蛋白表达显著升高；C4S或C6S联合LY294002同时处理细胞，WB结果显示LY294002能够显著抑制C4S和C6S对IGFBP5蛋白的促进作用，说明C4S和C6S调控IGFBP5的表达是通过PI3K/AKT通路来发挥作用的。
14.使用C4S或C6S处理细胞，同时干扰IGFBP5的表达，Transwell转移侵袭实验结果显示C4S和C6S是通过IGFBP5来调控胶质瘤细胞细胞的迁移侵袭能力。
15.C4S和C6S处理U251和U-87MG后，将细胞显微注射到斑马鱼受精48小时后胚胎卵黄囊，3天后发现经C4S和C6S处理后的胶质瘤细胞生长和侵袭能力显著高于对照组细胞。
16.把干扰CHST11和CHST3的U251和U-87MG细胞显微注射到斑马鱼受精48小时后胚胎卵黄囊中，3天后发现干扰CHST11和CHST3后的细胞生长和侵袭能力显著低于对照组细胞。
17.C4S和C6S处理带红色荧光标记的U251后，将细胞显微注射到斑马鱼受精48小时后胚胎脑内，3天后发现C4S和C6S处理后的细胞生长和侵袭能力显著高于对照组细胞。
结论
1.与正常脑组织相比，C4S和C6S在人脑胶质瘤组织中的表达明显升高，并且随着肿瘤的分级表达水平显著升高。
2.外源性的C4S及C6S一定程度能够促进细胞的增殖；体外结果显示C4S和C6S能够显著促进胶质瘤细胞的迁移侵袭能力。抑制C4S和C6S能够抑制细胞的増殖、迁移及侵袭能力，表明C4S和C6S可促进胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力。
3.C4S和C6S通过PI3K/AKT信号通路促进胶质瘤细胞的EMT转化和MMP-2表达，进而进一步影响胶质瘤细胞迁移和侵袭的能力。
4.C4S和C6S能够促进IGFBP5的表达，干扰CHST11和CHST3能够抑制IGFBP5的表达。沉默IGFBP5能够抑制胶质瘤细胞的迁移侵袭能力。
5.C4S和C6S可通过PI3K/AKT信号通路调控IGFBP5的表达，影响胶质瘤细胞的迁移和侵袭能力。
6.体内实验结果显示C4S和C6S能够显著促进胶质瘤细胞在斑马鱼脑内及胚胎内的生长和侵袭能力；干扰CHST11和CHST3能够显著抑制胶质瘤细胞在斑马鱼胚胎内的生长和侵袭能力。