论文部分内容阅读
几百年来，结核病一直困扰着人类健康和经济发展。世界卫生组织调查显示，近年来结核病在全球范围内发病率呈急剧上升趋势，死亡率居传染性疾病死亡率第二名，我国是结核病高负担国家之一。全球有将近三分之一的人存在潜伏性结核感染(LTBI)，其中5–20％的人在两到五年内会发展成活动性结核。对潜伏性结核感染患者进行早期诊断和适当的干预，防止其发展成为活动性结核，是结核病防治的关键策略之一。目前对潜伏性结核病诊断主要基于IFN-γ的检测。 本文建立了两种IFN-γ定量检测方法：以包被有IFN-γ捕获抗体的磁性微球为固相载体，采用HRP催化TMB显色为检测体系，建立了稳定的磁酶免双抗体夹心法定量检测IFN-γ的方法。该方法在0-1000 pg/mL浓度范围内检测线性良好，标准曲线线性公式为y=0.001x+0.0686，相关系数为0.9996，最低检出限可达23.2 pg/mL。磁酶免的检测方法比传统的ELISA方法操作简单（只需要一步清洗），检测时间更短（2 h），重现性很好，并且有很大的快速、自动化、高通量、多指标检测的应用前景。另外，我们建立了AlphaLISA定量检测IFN-γ方法，此方法在IFN-γ为0-8 IU/mL的浓度范围内线性非常好，拟合得到的线性方程为y=2199.8x+2073.8，标准曲线相关系数 R2=0.9997，检测低限为19.0 mIU/mL，方法的回收率为81.6%到102.1%，批间和批内变异系数小于5%。并且，此方法的稳定性良好，受基质效应影响小，反应只需半小时。 随后，我们选用性能较好的AlphaLISA方法进行了临床验证。使用AlphaLISA定量检测IFN-γ检测伽马干扰素体外释放试验中IFN-γ的含量，并与商业化潜伏性结核诊断的产品T-SPOT.TB进行对比研究，结果显示两种方法的一致性很高（97.2%，κ=0.94），表明课题组建立的AlphaLISA检测IFN-γ体系是诊断潜伏性结核感染的良好方法。