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目的：
1.体内实验：构建广州管圆线虫幼虫实验感染ICR小鼠动物模型，采用HE染色、脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)及Western-blot方法逐步检测其脑组织细胞凋亡情况。
2.体外实验：经原代分离、纯化、鉴定培养出ICR小鼠脑微血管内皮细胞和星型胶质细胞并建立血脑屏障细胞模型；广州管圆线虫幼虫提取液作用血脑屏障细胞模型后观测其功能损伤；检测广州管圆线虫幼虫提取液诱导血脑屏障细胞凋亡情况。探讨广州管圆线虫幼虫入侵小鼠血脑屏障与细胞凋亡相关性。
方法：
1.体内实验：
(1)构建广州管圆线虫幼虫实验感染ICR小鼠动物模型。
(2)取正常ICR小鼠和广州管圆线虫幼虫实验感染ICR小鼠的脑组织，做石蜡切片行HE染色初步观察感染鼠和实验鼠脑组织细胞形态学变化。
(3)脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)观察广州管圆线虫幼虫实验感染ICR小鼠的大脑、小脑、脑干的细胞凋亡情况并计算细胞凋亡率。
(4)Western-blot方法检测广州管圆线虫幼虫感染第10天、13天、15天、17天的ICR小鼠脑组织内凋亡蛋白Caspase3的变化情况。
2.体外实验：
(1)原代培养方法分离、纯化和鉴定ICR小鼠脑微血管内皮细胞和星型胶质细胞。
(2)将培养好的两种细胞在0.4μm孔径的细胞培养插多孔滤膜(transwell)上下两侧进行共培养，通过渗滤实验和通透性实验鉴定其符合在体状态血脑屏障特征。
(3)取广州管圆线虫幼虫及其提取液作用于已构建好的血脑屏障细胞模型，观察对其渗滤和通透性的影响。用cck-8法检测广州管圆线虫幼虫提取液对前述原代培养的小鼠脑微血管内皮细胞和星型胶质细胞的生长抑制作用浓度，进而用TUNEL和Annexin-v-FITC/PI细胞双染方法检测广州管圆线虫幼虫提取液致脑微血管内皮细胞和星型胶质细胞凋亡情况。
结果：
1.体内实验：
(1)感染广州管圆线虫幼虫的小鼠脑组织切片经HE染色后光镜下进行初步组织形态学观察，正常对照鼠脑细胞切片细胞形态一致，细胞核完整染成均一蓝色，而感染鼠脑组织切片中细胞胞体变小变圆，有核固缩、深染现象。
(2)TUNEL结果显示感染广州管圆线虫幼虫的ICR小鼠大脑、小脑、脑干组织均有细胞凋亡发生，细胞凋亡率分别为20％、50％和70％。
(3)Western-blot结果显示随着广州管圆线虫幼虫感染ICR小鼠的感染时间的延长，感染鼠脑组织的活性Caspase3量递增，全长Caspase3量递减，表明组织细胞凋亡的程度逐步增加。
2.体外实验：
(1)经原代分离、纯化、鉴定出ICR小鼠脑微血管内皮细胞和星型胶质细胞并成功构建血脑屏障细胞模型。
(2)将广州管圆线虫幼虫及其提取液作用于血脑屏障细胞模型后可引起其渗滤和通透性增加，导致其屏障功能损伤。
(3)TUNEL和Annexin-v-FITC/PI细胞双染结果证实广州管圆线虫幼虫提取液可致原代培养的ICR小鼠脑微血管内皮细胞和星型胶质细胞凋亡。
结论：
本实验成功证实了广州管圆线虫幼虫可致实验感染ICR小鼠脑组织细胞凋亡；以及成功构建血脑屏障细胞模型，观察到广州管圆线虫幼虫及其提取液可引起血脑屏障细胞模型功能损伤；并且检测到广州管圆线虫幼虫提取液可诱导血脑屏障细胞发生凋亡，这是导致血脑屏障功能损伤的相关因素之一。