高压静电场通过CAMKK2-AMPK途径促进骨骼肌修复

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骨骼肌不仅是动物机体运动系统的重要组成部分,在机体的能量代谢中也发挥着不可或缺的作用。骨骼肌受损会对机体健康产生很多危害,并直接影响体内复杂的内分泌活动及能量供应。研究发现,电磁场通过影响动物体内通道离子的代谢过程,对动物体产生有益作用,但其是否能够通过受钙离子所响应的信号通路来影响骨骼肌代谢目前未见报道。本试验通过构建小鼠骨骼肌急性损伤模型,并对其外部施加高压静电场刺激进行治疗,旨在探究电场治疗对骨骼肌损伤修复的影响,为深入了解骨骼肌损伤后修复的代谢机制,也为高压静电场作为动物机体辅助治疗手段的应用提供思路及理论依据。本试验主要内容及研究如下:(1)试验通过对小鼠腓肠肌注射1.2%的Ba Cl2溶液建立骨骼肌急性损伤模型,利用q RT-PCR,Western blot及HE染色等方法研究肌肉受到损伤后,肌肉生成相关因子及形态的变化。结果显示:骨骼肌损伤后,肌纤维发生溶解破裂,细胞间隙变大,模型构建成功。q RT-PCR及Western blot结果表明损伤后骨骼肌中Myo D和Myo G的相对表达量显著高于正常组,说明注射Ba Cl2溶液会导致骨骼肌损伤并影响骨骼肌代谢。(2)为研究高压静电场对肌肉生成相关因子的影响,试验利用小鼠骨骼肌急性损伤模型,对其进行正、负高压静电场每天两小时,场强大小为±2.4 kv/cm的辐照治疗,通过Western blot及q RT-PCR结果发现:在正高压静电场的作用下,肌生成相关因子Myo D和Myo G的相对表达量显著高于对照组,Myostatin相对表达量低于对照组;负高压静电场下Myo D和Myo G的蛋白相对表达量低于对照组。结果说明高压静电场可以显著影响肌肉损伤后成肌相关因子的表达且具有积极的作用。(3)为探讨高压静电场是否可以促进骨骼肌损伤后的肌细胞再生。对骨骼肌急性损伤后的小鼠进行正、负高压静电场治疗,通过Western blot、q RT-PCR、HE染色及油红O染色试验技术进行研究,结果显示:在接受正高压静电场的治疗后,PAX7的相对表达量显著提升;负高压静电场治疗后,PAX7的活性被抑制。此外,正负高压静电场治疗后,α-Actinin相对表达量显著性上调,同时HE染色观察到大量再生肌纤维的出现,并且油红染色结果发现脂肪的快速募集及消退。结果说明使用高压静电场可以明显促进骨骼肌损伤后的再生。(4)为深入了解高压静电场影响骨骼肌再生的具体信号机制,试验利用正、负高压静电场对小鼠骨骼肌急性损伤模型进行治疗,通过Western blot,q RT-PCR技术检测Ca2+调控的CAMKK2-AMPK信号通路。结果显示:经过高压静电场处理后,CAMKK2,AMPK及其下游因子PGC1-α表达量显著高于对照组,表明高压静电场可以激活CAMKK-AMPK信号通路以促进肌肉损伤后的修复。总之,本研究结果显示,高压静电场可以激活CAMKK2-AMPK信号通路,并且可以显著促进了骨骼肌损伤后的再生。
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