【摘 要】
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LncRNAs在正常组织细胞和肿瘤的生命活动过程中起重要作用。根据前期对C57/BL6J小鼠黑色素细胞和黑素瘤细胞B16-F10转录组数据分析得差异表达LncRNA-177922,丝裂原活化蛋白激酶15（mitogen-activated protein kinase 15,MAPK15）调控肿瘤的发生和发展,被预测为LncRNA-177922的靶基因。因此,LncRNA-177922可能参与黑素
【基金项目】
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山西省三晋学者人才项目； 山西省研究生创新项目（2019SY214）；
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LncRNAs在正常组织细胞和肿瘤的生命活动过程中起重要作用。根据前期对C57/BL6J小鼠黑色素细胞和黑素瘤细胞B16-F10转录组数据分析得差异表达LncRNA-177922,丝裂原活化蛋白激酶15（mitogen-activated protein kinase 15,MAPK15）调控肿瘤的发生和发展,被预测为LncRNA-177922的靶基因。因此,LncRNA-177922可能参与黑素瘤细胞生物学特性的调控。为了研究LncRNA-177922在黑素瘤细胞中的作用,本研究将LncRNA-177922在B16-F10细胞中过表达,分析B16-F10细胞生物学变化及相关分子机制,具体如下:1、共转染pmir GL0-MAPK15、pc DNA3.1-LncRNA-177922或空载质粒,在293T细胞中。进行双荧光素酶报告基因检测,结果显示:与对照组相比,LncRNA-177922与MAPK15共转染导致荧光素酶活性显著降低（P＜0.001）,说明二者存在靶向关系。2、通过q PCR、Western blot、Fontana-Masson染色检测LncRNA-177922对B16-F10细胞黑色素生成的影响。结果显示:LncRNA-177922上调酪氨酸酶活性,导致MITF及下游TYR、TYRP1、TYRP2的表达水平上调,促进各类黑色素含量显著升高（P＜0.01）。3、通过q PCR、Western blot和CCK-8检测LncRNA-177922对B16-F10细胞增殖的影响,结果显示:与对照组相比,LncRNA-177922上调MEK1、ERK、MNK1的表达水平,引起细胞显著增殖（P＜0.01）。4、通过Western blot和细胞划痕试验检测LncRNA-177922对B16-F10细胞迁移的影响,结果显示:与对照组相比,LncRNA-177922显著上调Rho和FAK蛋白表达水平,促进B16-F10细胞的迁移（P＜0.05）。5、通过q PCR、Western blot和细胞免疫荧光检测LncRNA-177922对B16-F10细胞自噬的影响,结果显示:与对照组相比,LncRNA-177922下调自噬相关分子LC3B以及促m TOR、PI3K、AKT的表达,抑制B16-F10细胞的自噬（P＜0.01）。综上所述,LncRNA-177922靶向MAPK15参与调控B16-F10细胞黑色素生成、增殖、迁移和自噬过程,为黑素瘤的治疗提供理论基础。
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