【摘 要】
:
前言:阿尔茨海默病(Alzheimers disease,AD)是一种多见于老年人的神经系统变性疾病,表现为进行性记忆力减退和痴呆、认知障碍、运动障碍。其特征性病理学改变是神经纤维缠结(neuofibrillary tangle,NFT),大量记忆性神经元数目减少,以及老年斑(senile plaque,SP)的形成。β淀粉样蛋白(Aβ)是老年斑的主要成分,它的异常沉积是AD发病的重要危险因素。β
论文部分内容阅读
前言:
阿尔茨海默病(Alzheimers disease,AD)是一种多见于老年人的神经系统变性疾病,表现为进行性记忆力减退和痴呆、认知障碍、运动障碍。其特征性病理学改变是神经纤维缠结(neuofibrillary tangle,NFT),大量记忆性神经元数目减少,以及老年斑(senile plaque,SP)的形成。β淀粉样蛋白(Aβ)是老年斑的主要成分,它的异常沉积是AD发病的重要危险因素。β淀粉样蛋白具有神经毒性,可诱导神经元凋亡。用Aβ25-35直接诱导PC12细胞凋亡建立AD细胞模型是体外进行AD研究的理想模型。大量的实验已证明亲环素A(cyclophilin A,CyPA)可以保护神经元抵抗氧化应激等损伤。Boulos等研究了CyPA的作用,发现在大鼠皮层神经元由腺病毒介导CyPA的过表达可以明显保护神经元抵抗氧化应激和缺血性损伤,并且利用在培养的神经元中加入纯化的CyPA蛋白也可保护神经元抵抗氧化应激和缺血性损伤。因此本实验以Aβ25-35损伤PC12细胞为模型,研究CyPA是否对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有神经保护作用.
资料与方法:
将PC12细胞分为3组:正常对照组,Aβ损伤组,药物保护组。Aβ损伤组用Aβ25-35处理细胞,药物保护组在用Aβ25-35处理前30分钟加入重组的人亲环素A(rhCyPA)。
1、用MTT法检测细胞存活率:将PC12细胞接种于96孔细胞培养板,分组分别加药,加入MTTT15μl继续培养4 h,加入DMSO100μL,用酶标仪在570nm.波长处读取各组细胞的吸光值(OD值),减去背景OD值。
2、采用HE染色法观察细胞形态。
3、用免疫组织化学方法检测bc1-2,bax蛋白的表达。采用SABC法,将PC12细胞爬片固定,按免疫组织化学方法染色。Metamorph软件分析吸光度,用吸光度(OD值)表示蛋白的表达水平。
4、Annexin-V流式细胞仪检测凋亡率。
将PC12细胞接种于25ml培养瓶中,按分组分别加药。收集细胞制备单细胞悬液,将等体积的细胞悬液和PI染液混合,送流式细胞仪检测。数据用SPSS12.0软件包进行分析,数据以均数士标准差表示,统计分析用t检验。认为P<0.05结果有统计学意义。
实验结果:
1、MTT法检测细胞存活率:Aβ损伤组与对照组相比较OD值及细胞存活率显著降低,药物保护组与Aβ损伤组相比OD值及细胞存活率显著升高。
2、HE染色光镜下观察:(1)对照组:正常PC12细胞单层生长,胞体饱满,细胞数量多,细胞间联系紧密,相互交织成簇状;(2)Aβ损伤组:胞核固缩、胞浆呈淡红色,细胞数量明显减少;(3)药物保护组:部分细胞可见胞核固缩,细胞数量较Aβ损伤组明显增多。
3、免疫组织化学实验结果可见Aβ损伤组中bcl-2的表达比正常对照组低,bax的表达比正常对照组高;药物保护组bcl-2的表达比Aβ损伤组升高,bax的表达比Aβ损伤组降低。
4、流式细胞仪检测凋亡率:Aβ损伤组细胞凋亡百分率明显升高,药物保护组细胞凋亡百分率明显降低。
结论:
CyPA对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有一定的保护作用。CyPA能上调Aβ25—35诱导PC12细胞bcl-2的表达,抑制bax的表达。
其他文献
目的:研究槲皮素(Que)对培养的乳鼠心脏成纤维细胞的纤维连接蛋白(FN)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响,探讨其在心肌肥厚中可能的作用机制。方法:1.细胞分离培养和鉴定:用胰酶消化法分离细胞,差速贴壁分离法获得心肌成纤维细胞,光镜和免疫组化的方法鉴定细胞。2.细胞增殖检测:WST法测定细胞增殖,免疫组化方法测定心肌成纤维细胞FN及TGF-β1的表达。3.实验分组:根据不同的药物及药物
目的:PET/CT是近几年才发展起来的影像融合技术,进入临床的时间尚短。18F-FDG PET/CT显像目前主要用于肿瘤的诊断和治疗后监测。四川省人民医院PET/CT中心自2005年运行以来,积累了2千病例资料。本文即对其中75例资料完整的妇女恶性肿瘤病例进行回顾性分析,以探讨18F-FDG PET/CT显像对妇女恶性肿瘤临床应用的价值。方法:1、显像设备及质控PET/CT仪器为德国Siemens
目的:研究CO2气腹不同压力对大鼠肠粘膜屏障功能的影响及可能机制。方法:本实验利用SD大鼠建立CO2气腹模型,维持气腹时间90分钟,将45只健康SD大鼠随机分为对照组,10mmHg气腹组和20mmHg气腹组,共3组,每组15只。两气腹组各按解除气腹后第5、60、120分钟分为3组,每组5只SD大鼠,检测解除气腹后相应时间肠粘膜组织匀浆中丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)以
目的:探讨缺血预处理及后处理对CO2气腹模型大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法:将24只雄性SD大鼠随机分为四组,即气腹组(P)、缺血预处理组(IP)、缺血后处理组(IPo)、对照组(C),对照组接受假手术,其余各组建立CO2气腹模型,气腹压力15mmHg,P组充气60min后放气30min,IP组在持续充气前先进行10min充气和10min放气,IPo组在充气60min后行三个循环的放气1m
研究目的研究99TCm标记双半胱氨酸—鸟嘌呤(99Tcm-ethylenedicysteine-guanine,99Tcm-EC-Guanine)在正常小鼠、荷瘤小鼠、炎症模型小鼠体内的分布规律,探讨99Tcm-EC-Guanine作为嘌呤类肿瘤显像剂的可能性。研究方法:1、99Tcm-EC-Guanine在正常小鼠体内分布的研究:用纸层析法测定99Tcm-EC-Guanine在体外的标记率。取正
目的:目前,化疗仍然是治疗恶性肿瘤的重要手段,一些患者在化疗前后对某些药物产生耐药性,从而影响化疗效果。研究发现,导致肿瘤化疗失败的原因之一是肿瘤对化疗药物的多药耐药(multidrug resistance MDR)。它严重影响化疗患者的疗效及预后。MDR形成机理复杂,其中多药耐药基因(mdr1)编码的P-糖蛋白(Pgp)过度表达是导致MDR的原因之一。肿瘤多药耐药逆转剂(MDR reversa
目的:探讨化疗后血清β2-微球蛋白(β2-MG)水平变化与化疗疗效之间的关系。方法:74例晚期肺癌患者,分别检测化疗前后患者血清β2-MG水平。首先,运用两独立样本的Wilcoxon Mann-Whitney检验(非参数检验),对化疗前各临床病理特征间的血清β2-MG水平进行比较。然后,根据化疗疗效,将患者分为病灶缓解组,病灶稳定组和疾病进展组,运用配对样本的Wilcoxon符号秩检验(非参数检验
目的:通过检测高眼压状态下和高眼压经TGF-β1干预状态下的大鼠视网膜神经节细胞抗凋亡基因BCl-2的表达,探讨TGF-β1对大鼠视网膜神经节细胞抗凋亡基因Bcl-2的表达的影响。方法:对54只108眼大鼠应用免疫组化SP法检测正常眼压组6只12眼、普通高眼压组24只48眼、TGF-β1干预高眼压组24只48眼中的Bc1-2的表达情况,其中普通高眼压组、TGF-β1干预高眼压组分别于眼压恢复后4h
目的:肺间质纤维化是一种病因未明,发病机制不清,缺乏治疗手段的致命性肺间质疾病,肺间质纤维化的病理特征是肺泡上皮细胞损伤,成纤维细胞灶的形成以及细胞外基质(ECM)的过度沉积,最终导致肺组织结构的异常重构。近年来的研究发现成纤维细胞灶主要由表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的肌成纤维细胞构成,是造成ECM异常沉积的主要细胞。同时研究证实转化生长因子-β1(TGF-β1)是关键的致纤维化细胞因子,
最低肺泡有效浓度(minimal alveolar concentration,MAC)是指在一个大气压下,挥发性麻醉药和纯氧同时吸入时,在肺泡内能达到使50%的病人或动物对伤害刺激不会引起体动反应的浓度。在临床麻醉中,由于肌松药和镇静药的复合应用,使得通过观察切皮时身体的交感反应测量吸入麻醉药MAC值显得非常重要。这就涉及MACBAR的概念。MACBAR(the minimal alveolar