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目的:探讨miR-21与BMP9在成骨分化过程的表达关系,明确miR-21在BMP9诱导成骨分化中的表达情况;揭示miR-21与BMP9联合后的成骨效应,明确miR-21协同BMP9的成骨作用;明确miR-21在成骨分化过程中的靶基因,证明其与miR-21的直接靶向作用。方法:首先用Ad-BMP9感染C2C12,MEFs,C3H10 T1/2细胞,采用Q-PCR方法在0,1,3,5,7,9天检测miR-21的表达情况。搜集健康人骨髓标本,分离培养骨髓间充质干细胞(HMSC),分别在2,3,4代检测miR-21的内源性表达。观察miR-21在HMSC分化过程中的表达情况。首先通过检测早期成骨指标碱性磷酸酶染色的变化以及茜素红S检测晚期成骨指标钙盐沉积来验证miR-21在BMP9诱导成骨分化中的作用。随后,通过Western Blot方法来检测miR-21,antimiR-21对BMP9/Smad经典信号通路下游信号分子p-Smad1/5/8,Runx2表达的影响。运用生物信息学分析,搜寻miR-21在BMP9诱导成骨分化中的潜在靶基因,过表达miR-21后检测Smad7的基因和蛋白水平表达情况。采用双荧光素酶报告实验,验证miR-21与Smad7的直接靶向作用。结果:在BMP9诱导成骨分化过程中,随着培养时间的增加,miR-21在三株细胞中表达升高,3天后表达又会降低。在HMSC传代过程中,miR-21表达有升高。MiR-21可以增强BMP9诱导的ALP活性和钙盐沉积。MiR-21可以升高p-Smad1/5和Runx2的表达。生物信息学分析得出,Smad7为miR-21在BMP9诱导成骨分化中的潜在靶基因。双荧光素酶活性报告实验得出,miR-21可以直接靶向Smad7。结论:BMP9使miR-21表达升高,miR-21可以协同BMP9促进早中期间充质干细胞成骨。而且,miR-21协同BMP9的成骨作用可能是通过靶向Smad7而发挥的。