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1,3-丙二醇(1,3-PD)是一种重要的化工原料,其生物合成过程已引起人们越来越多的重视。对巴斯德梭菌(Clostridiumpasteurianum)利用甘油产生1,3-PD的发酵研究表明,采用补料批式发酵时,其产量为13.1g.1-1,而主要副产物丁醇的合成量为17g.1-1。分析表明,在该发酵过程中,丁醇合成是主要代谢通路,1,3-PD的代谢流量仅占20%。为了降低丁醇产量,采用热不对称交错PCR(TAIL-PCR),克隆了C.pasteurianum中丁醇合成的关键酶基因——β-酮硫解酶基因,但是由于C.pasteurianum体内的限制性内切酶限制外源DNA,使得拟用反义RNA方法干扰丁醇合成基因表达的实验未能继续。采用由Clostridiumpasteurianum的dhaBCE和Escherichiacoli的yqhD基因构建的表达质粒pUDYP转化产酸克雷伯氏杆菌(Klebsiellaoxytoca),用于生产1,3-PD。微供氧发酵实验表明,工程菌株K.oxytoca(pUDYP)的1,3-PD最高产量为52.9g.1-1,摩尔转化率为56.17%,发酵初期(0-16h)的生产强度比野生型菌株K.oxytoca高44.7%,发酵16h后,由于质粒不稳定,导致K.oxytoca(pUDYP)的生产强度迅速降低。用NTG对C.pasteurianum进行诱变,然后经高浓度1,3-PD耐受和产酸少模型两轮筛选,得到231株突变体。发酵结果表明,没有获得1,3-PD高产突变株。确定了肺炎克雷伯氏杆菌(Klebsiellapneumonia)M53的最优发酵工艺为:采用微供氧发酵(0.2vvm的空气,转速为280rpm),起始甘油和辅助底物蔗糖浓度分别为20g.1-1和5g.1-1。待底物消耗到1g.1-1时,开始流加补料,补料液中甘油-蔗糖质量比为10/1。在此条件下,1,3-PD最高产出浓度达55.66g.l-1生产强度116g.l-1.h-1,摩尔转化率37.4%。
利用构建的乳酸缺失突变株M53(ldh-)进行发酵实验,结果表明,1,3-PD的转化率并未增加。