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目的:1.探讨阿霉素(Adriamycin,ADM)对人舌癌细胞系Tca-8113干预后单细胞克隆培养能否形成全克隆、部分克隆和旁克隆,并对全克隆进行成瘤性检测。2.基于癌干细胞耐药特性,通过应用单细胞克隆培养法和进行裸鼠成瘤实验,以期筛选并富集舌癌肿瘤干细胞样细胞。研究方法:第一部分,以Tca-8113为研究对象,分A、B、C三组进行单细胞克隆培养和观察研究。A组采用有限稀释法对Tca-8113进行单细胞克隆培养,观察培养所形成的三种不同形态克隆的特性:克隆形成率、各类克隆构成比和克隆生长曲线;B组用三种浓度阿霉素(0.01μg/ml ADM,0.05μg/ml ADM和0.1 0μg/ml ADM)对Tca-8113进行体外干预48h后,再采用有限稀释法进行单细胞克隆培养,并同样观察培养后所形成的不同形态克隆的特性;C组则对Tca-8113采用有限稀释法进行单细胞克隆培养2周后,再用三种不同浓度阿霉素(0.01μg/ml ADM, 0.05μg/mlADM和0.10μg/ml ADM)对培养出的全克隆细胞干预48h,观察干预后一段时期内的全克隆存活情况以及克隆细胞形态变化。第二部分,将A、B、C组存活的全克隆进行传代培养,待细胞传代扩增至2×106个细胞后进行免疫缺陷裸鼠成瘤实验,以检测克隆细胞的致瘤性。实验结果:第一部分实验,A组中经单细胞克隆培养的Tca-8113细胞能形成全克隆、部分克隆和旁克隆,其构成比分别为(49.02±4.44) %,(26.25±1.89) %和(24.72±4.27) %,其总克隆形成率为(57.28±1.81) %。B 组中经 0.01μg/ml ADM,0.05μg/ml ADM 和 0.10μg/ml ADM 体外干预 48h后的Tca-8113干预细胞均能形成克隆。其中,0.011μg/ml ADM干预细胞能形成全克隆、部分克隆和旁克隆,所占的构成比分别为(52.20±1.92) %、(25.31 ±2.30) %和(22.49±1.82) %,总克隆形成率为(65.98±3.12) %;而0.05μg/ml ADM干预细胞或0.10μg/ml ADM干预细胞进行单细胞克隆培养只能形成全克隆,部分克隆与旁克隆均未见形成,总克隆形成率分别为为(0.693±0.140)‰和(0.053±0.032)‰。C 组中 Tca-8113 全克隆经 0.01μg/ml ADM,0.05μg/ml ADM和0.10μg/ml ADM干预48h后的干预克隆细胞存活率分别为(91.15±1.63) %,(61.14±5.35) %和(32.47±1.48) %。第二部分实验结果显示,在A、B、C组中存活全克隆的增殖传代细胞均能在免疫缺陷裸鼠皮下成瘤,成瘤率为100%,且随阿霉素浓度增高,成瘤时间缩短。结论:1.舌癌Tca-8113细胞和阿霉素干预的Tca-8113细胞均具有全克隆形成能力。2.Tca-8113全克隆是肿瘤干细胞克隆的可能性较大,对阿霉素具有较强的抵抗性。3.阿霉素干预Tca-8113全克隆的方法可有效的富集到高致瘤性的舌癌肿瘤干细胞样细胞。