论文部分内容阅读
目的:通过新一代测序技术SOLiD对结肠癌、结肠息肉和结肠正常组织的转录组测序,筛选出新的差异表达基因,并探讨其在结肠癌中的生物学作用。 方法:病历资料于2011年3月15日从哈医大肿瘤医院获取,该病人为女,44岁,乙状结肠癌伴息肉。提取此样本的结肠癌组织、结肠息肉组织及结肠正常组织的总RNA。建立cDNA文库,并用油包水PCR的方法对文库进行扩增。将扩增后的文库在二代测序仪SOLiD上测序。将所得原始数据用BioScope软件初步分析后,用Cufflinks软件进行差异表达分析。将差异表达基因用DAVID和GO软件进行聚类分析和注释,筛选出未报道过的结直肠癌中差异表达基因。用Rcaltime—PCR进行验证后,探讨这些基因在在结直肠癌中的生物学用。 结果:测序结果表明:共得到有差异表达的基因总数为9220个。将所得基因表达差异两两比较发现:癌组织与息肉组织相比基因差异表达数为6024;癌组织与正常组织相比基因差异表达数为6327;息肉组织与正常组织相比基因差异表达数为4231;有1272个基因在所有比较中差异均不相同。将筛选出的差异表达基因基于Gene Ontology(GO)数据库进行GO注释,得到基因参与的所有的GO。经聚类分析后得到与癌症信号转导通路有关的基因数为126个,去掉已知的与结直肠癌相关的基因数为41个,得到的基因数为85个。将85个基因分别归类为5组,分别是:癌组织与息肉组织相比和癌组织与正常组织相比表达均上调组25个;癌组织与息肉组织相比和癌组织与正常组织相比表达均下调组21个;癌组织与息肉组织表达相比上调和癌组织与正常组织相比表达下调组6个;癌组织与息肉组织表达相比表达下调和癌组织与正常组织相比表达上调组18个、只在癌组织与息肉组织相比有差异表达组15个。以最后一组为研究对象,选出9个基因设计引物进行Realtime-PCR进行验证后,有7个基因的表达情况与测序结果一致。经文献检索后筛选出4个未曾报道过的结直肠癌中差异表达基因,分别是FN1、LAMC1、PIAS2、STK36。分析并讨论以上4个基因在结肠癌中的生物学作用。 结论:利用二代高通量测序技术检测出了4个结肠癌的转录组中未曾报道过的新基因,这四个基因是FN1、LAMC1、PIAS2、STK36。并分析出PIAS2可能参与STAT1中,STK36可能参与Hh信号转导通路中。