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目的:观察不同基因型和不同月龄端粒酶基因敲除小鼠(telomerase-deficient,Terc-/-)行为学变化特点,并在此基础上研究针刺足三里穴对Terc-/-小鼠海马区TRKB-ERK信号通路蛋白表达的影响。 方法:1.选用第3代Terc-/-小鼠,在小鼠3-4周龄时进行分笼、采血,经PCR法基因鉴定小鼠基因型。筛选出Terc-/-和野生型小鼠,随机选出2月龄、3月龄、5月龄、7月龄及9月龄小鼠各8只,共40只。对不同月龄Terc-/-和野生型小鼠进行行为学检测。检测完成后,对检测数据进行分析,观察Terc-/-和野生型小鼠随月龄增长其行为学变化特点。2.分别取24只7月龄Terc-/-和野生型小鼠,随机分为空白组、手针组和电针组,每组各8只,共48只。空白组在相同环境下饲养,仅模拟抓握;手针组取双侧足三里穴直刺约1.5mm,手针刺激30min,每5分钟行捻转手法一次,每天1次,连续干预7天;电针组取双侧足三里穴直刺约1.5mm,电针刺激30min,交替波,频率为2/50Hz,强度为2mA,每天1次,连续干预7天;干预结束后次日取脑组织,采用免疫组化法及免疫印迹法检验TRKB、ERK、P-ERK和NF-kB蛋白在海马区的表达。 结果:1.Morris水迷宫:与野生型小鼠相比,Terc-/-小鼠随月龄增长其潜伏期逐渐延长,逃避潜伏期的目标象限时间比逐渐减小,两组间在2、3和5月龄时无显著差异(p>0.05),但在7和9月龄时有显著差异(p<0.05)。2.自主活动测试:与野生型小鼠相比,Terc-/-小鼠在2、3和5月龄时的自主活动均无显著差异(P>0.05),但在7和9月龄时两组间出现显著差异(P<0.05)。3.老化度评分:与野生型小鼠相比,Terc-/-小鼠的评分值在2、3月龄时无显著差异(p>0.05),在5、7和9月龄时显著增高(P<0.05)。4.免疫组化法结果:(1)干预后Terc-/-小鼠海马区TRKB蛋白阳性目标面密度:空白组(0.0233±0.007)、手针组(0.0312±0.005)、电针组(0.0363±0.007),电针组与空白组比较,差异具有显著性(P<0.05);Terc-/-小鼠海马区ERK蛋白阳性目标面密度:空白组(0.0148±0.074)、手针组(0.0270±0.010)、电针组(0.0201±0.008),手针组与空白组比较,差异具有显著性(P<0.05)。5.免疫印迹法结果:(1)干预后Terc-/-小鼠海马区TRKB蛋白相对体积:空白组(0.6940±0.249)、手针组(0.9525±0.139)、电针组(0.9801±0.129),手针组和电针组与空白组比较,差异均具有显著性(P<0.05)。Terc-/-小鼠海马区NF-kB蛋白相对体积:空白组(0.2891±0.070)、手针组(0.4066±0.126)、电针组(0.4856±0.066),手针组和电针组与空白组比较,差异均具有显著性(P<0.05)。 结论:1.与同龄野生型小鼠相比,Terc-/-小鼠随月龄增长其行为活动出现显著增龄性变化,Terc-/-小鼠的衰老特点与年龄密切相关,年龄越大,衰老速度及程度越大,尤其在7月龄以后更为明显。 2.针刺“足三里”穴可促进Terc-/-小鼠海马区TRKB、ERK和NF-KB蛋白的表达,但对野生型小鼠影响不显著。