水稻OsVDAC3及其互作蛋白亚细胞定位和功能初步分析

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线粒体是细胞能量代谢中心,也是细胞死亡调控中心。电压依赖性阴离子通道(voltage-dependent anion channels,VDACs)是存在于所有真核生物线粒体外膜上的一类高度保守蛋白。本实验室前期在水稻中鉴定出了8种VDAC蛋白OsVDAC18,并筛选出与OsVDAC3互作的3个蛋白OsV3IP13。本实验主要围绕OsVDAC3和OsV3IP1-3进行,取得以下4个方面结果:1.用生物信息学和定量PCR方法分析水稻YTA、YTB和NIP不同发育时期幼穗,四叶期根、叶鞘和叶中OsVDAC3和OsV3IP13的表达量,结果表明OsV3IP2和OsV3IP3在YTB和NIP中表达模式相似,而与YTA中差异明显,并且OsVDAC3在YTB的1.54.0 cm幼穗中非常高水平表达。YTB与YTA属于同核异质系(YTB为可育细胞质,YTA为不育细胞质),NIP为常规品种;而YTB和NIP都是雄性可育,而YTA为雄性不育,这些结果是否预示它们的表达与雄性的育性相关有待进一步研究。2.构建了pM999-OsVDAC3/OsV3IP13/N/C-GFP瞬时表达载体,转化水稻原生质体后用激光共聚焦显微镜观察荧光信号。实验结果表明,OsVDAC3-N、OsVDAC3、OsV3IP1-C、OsV3IP1定位于线粒体;OsVDAC3-C、OsV3IP1-N、OsV3IP2-N、OsV3IP2-C1、OsV3IP2-C2、OsV3IP2、OsV3IP3-N、OsV3IP3-C及OsV3IP3定位于细胞质。OsVDAC3的信号肽位于N端,OsV3IP1的信号肽位于C端,OsV3IP2和OsV3IP3没有信号肽。这些结果为以后研究OsVDAC3的结构与功能奠定了理论基础。3.BiFC实验结果表明OsVDAC3与OsV3IP3、OsV3IP3-N端结构域存在相互作用,而OsVDAC3与OsV3IP3-C端结构域没有相互作用,这说明OsVDAC3与OsV3IP3是OsV3IP3-N端结构域发生相互作用。4.通过基因型鉴定,获得了T0代OsV3IP12超表达转化植株,T0代与T1代OsVDAC3和OsV3IP2的CRISPR编辑植株的阳性植株和种子。T0代超表达转基因植株的育性和结实率存在着较大差异,没有明显规律。T0代OsVDAC3和OsV3IP2的阳性CRISPR编辑植株的育性明显低于阴性植株。T1代OsVDAC3和OsV3IP2的CRISPR编辑植株的花粉育性明显比T0代低,收到的种子实粒数明显低于T0代。OsVDAC3和OsV3IP2的功能是否与水稻的育性有关有待进一步证明。
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