背景:系统性红斑狼疮（SLE）是一种慢性全身性自身免疫病,狼疮性肾炎（LN）和弥漫性肺泡出血（DAH）是严重的SLE并发症,是导致患者死亡的主要原因。SLE发病机制复杂,多种因素包括遗传因素、免疫失调和环境因素等都参与其中。目前糖皮质激素及免疫抑制剂仍是治疗SLE的主要手段,但疗效有限并且毒副作用大,亟待探索SLE发病机制,寻求有效治疗靶点。中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（LCN2）是LN的生物标志物,对LN早期诊断、病情监测及预后评估有重要意义。此外,LCN2在免疫应答中起着重要作用,与炎症密切相关。目的:本课题旨在通过探索LCN2分子在LN和DAH中的作用,明确LCN2对SLE发病进程的潜在贡献。方法:1.基因芯片筛选SLE患者外周血单个核细胞（PBMCs）高表达基因,实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）验证筛选结果。RT-PCR检测na?ve CD4+T细胞LCN2基因表达水平。将SLE患者na?ve CD4+T细胞LCN2基因表达水平与患者的狼疮疾病活动度（SLEDAI）、蛋白尿及血清肌酐水平进行相关性分析。2.免疫组化和免疫荧光分别检测LN患者肾脏组织和肾脏不同细胞（T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和肾小管上皮细胞）LCN2表达水平。将LN患者肾脏组织LCN2表达水平与急性活动指数、慢性活动指数和肾小管间质炎症指数进行相关性分析。3.MRL/lpr鼠腹腔注射重组LCN2或抗LCN2抗体;LCN2缺陷小鼠和野生型C57BL/6鼠腹腔分别注射0.5ml的pristane。处理前后称量小鼠体重、脾脏重量、收集尿液。ELISA法检测尿微量白蛋白含量、血清抗双链DNA（ds-DNA）抗体,微板法检测尿肌酐水平。采用HE、PAS染色评估肾脏病理改变,免疫荧光检测肾脏IgG和C3的表达,RT-PCR检测肾脏炎症相关基因,免疫组化检测肾脏巨噬细胞和中性粒细胞的浸润,流式细胞术检测脾脏、肾脏及淋巴结T细胞亚群比例的变化情况。4.体外检测LCN2对Th1细胞分化的调控,采用野生型和LCN2缺陷的C57BL/6来源的na?ve CD4+T（加或不加LCN2预处理）向Th1细胞诱导分化,流式细胞术检测Th1细胞亚群的变化,RT-PCR检测Th1细胞相关基因,ELISA检测培养上清中IFN-γ蛋白水平。免疫印迹法（WB）检测转录激活因子STAT4及磷酸化（P）-STAT4蛋白表达。5.选取野生型C57BL/6小鼠和DAH小鼠的肺冰冻组织进行全基因组测序,RT-PCR和WB分别检测DAH小鼠肺LCN2的基因和蛋白水平,ELISA检测DAH小鼠血清和肺泡灌洗液（BALF）中LCN2蛋白水平。6.LCN2缺陷小鼠和野生型C57BL/6小鼠腹腔分别注射0.5ml的pristane,两周后处死小鼠,统计小鼠死亡率及肺泡出血情况,采用HE染色评估肺部病理改变,ELISA法检测BALF中炎症相关因子的表达,流式细胞术检测小鼠肺及BALF中T、B细胞、巨噬细胞和中性粒细胞的比例以及巨噬细胞凋亡百分率。结果:1.LN患者na?ve CD4+T细胞LCN2表达水平显著高于健康对照组及非LN的SLE患者,且SLE患者na?ve CD4+T细胞LCN2表达水平与SLEDAI评分、蛋白尿和血清肌酐水平存在正相关性。2.LN患者肾脏组织LCN2表达水平显著高于对照组。相关性分析发现,肾脏LCN2水平与肾脏的急性活动指数、慢性活动指数及肾小管间质炎症指数呈显著正相关。LN患者肾脏T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和肾小管上皮细胞表达的LCN2较对照组均显著增多。3.LCN2处理后狼疮小鼠尿蛋白显著增多,增生性肾小球肾炎和肾小管间质炎症加重,肾小球C3表达增多,肾脏促炎因子表达增多,巨噬细胞和中性粒细胞浸润增多;而抗LCN2抗体处理狼疮小鼠尿蛋白显著降低,肾小球细胞增殖和系膜基质沉积减少,间质病变改善,肾脏促炎因子表达以及巨噬细胞和中性粒细胞浸润减少;Pristane诱导LN后,与野生型C57BL/6小鼠相比,LCN2缺陷小鼠肾炎减轻。4.LCN2缺陷T细胞向Th1细胞分化受到抑制,STAT4磷酸化水平下调,补充LCN2后该抑制得到逆转。体内实验同样证实LCN2处理组狼疮小鼠Th1细胞增多,而中和LCN2或LCN2基因缺失狼疮鼠Th1细胞减少。5.Pristane诱导DAH后,小鼠肺中LCN2水平显著增高。随着肺泡出血加重,肺泡巨噬细胞（AM）减少、凋亡率增加,中性粒细胞增多。6.LCN2缺陷DAH小鼠肺组织弥漫性出血、渗出以及炎症细胞浸润减轻,BALF中AM凋亡减少,AM增多,中性粒细胞减少,炎症因子水平降低。结论:LN患者LCN2表达增多,LCN2通过IL-12/STAT4通路促进Th1细胞分化参与LN的发病和进展。DAH小鼠肺高表达的LCN2可促进肺泡巨噬细胞凋亡,诱导中性粒细胞招募至肺进而加重DAH。这些发现提示拮抗LCN2分子可能有助于治疗SLE。