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目的肺癌位列所有恶性肿瘤发病率和死亡率的第一位,就病因学来说至今却未被完全理解。近年来女性肺癌发病率增长明显,并且在患病年龄、发病时间、组织类型及生存期等方面存在显著的性别差异,这可能与性激素及其受体的作用相关。研究显示雌激素促进肺癌的增殖。因此对于女性病人需要考虑更佳个体化的治疗。临床试验证实抗雌激素治疗加靶向治疗对一些肺癌患者效果明显。但是其具体机制还不甚明了,有待更进一步的深入研究。SARI(Suppressor of AP-l,regulated by IFN)是近年新发现的抑癌基因,它能抑制转录因子AP-1,90%的人类癌症中都存在AP-1活性增高。将SARI递送到癌细胞,可抑制癌细胞增殖,促进细胞凋亡。由于90%的癌症都基于相似机制来存活和生长,所以SARI被认为可能成为多种癌症治疗的有效分子靶点。本课题小组的前期研究结果显示SARI与肺腺癌的侵袭转移有明显的关系,SARI能通过调节上皮间质化现象(EMT),从而抑制肺腺癌的侵袭与转移。但对于SARI是否能抑制肺腺癌细胞中雌激素的促增殖作用从而抑制肺腺癌的增殖与转移却从未被研究过。本实验拟探究SARI与肺腺癌细胞中雌激素信号通路的关系。方法通过转染真核重组质粒pcDNA-SARI的方法在肺腺癌细胞A549中过表达SARI蛋白,噻唑蓝(MTT)比色法观察雌激素处理前后细胞增殖情况,Western blotting法检测雌激素诱导的细胞增殖信号通路中相关蛋白Src,Akt及Erk的表达及活化情况。结果1.将pcDNA-SARI与相应空载体(pcDNA-Vec)转染A549细胞,Western blotting法检测SARI蛋白表达。结果显示,肺腺癌细胞A549中SARI极低表达。往肺腺癌细胞A549中转染入真核重组表达质粒pcDAN-SARI后,与空白组及空载体对照组(Control vector组)相比,pcDNA-SARI组SARI蛋白表达明显增强,成功建立高表达SARI A549细胞模型,为下一步有关SARI抑制雌激素诱导的肺腺癌增殖机理的研究奠定了基础,也使后续工作成为可能。2.使用MTT法检测细胞增殖能力。雌激素(E2)组增殖率为(148±10)%,细胞增殖率与对照组(Control vector组)相比较,上升48%(*P<0.05),雌激素促进肺腺癌细胞的增殖；雌激素(E2)+pcDNA-SARI组增殖率为(92±4)%,即过表达SARI后再用雌激素处理,相比较雌激素(E2)组,细胞增殖率下降56%(**P<0.05)。 pcDNA-SARI组增殖率为(68±6)%。说明SARI抑制雌激素诱导的肺腺癌细胞增殖。3. Western blotting法检测各组中Src蛋白的表达情况。用雌激素处理后,pSrcy416表达增强,相对表达量为2.59±0.36,而总Src表达不变；但是当过表达SARI后,再用雌激素处理pSrcy416表达下调,相对表达量为0.88±0.22,总Src表达不变。两组pSrcy416蛋白表达量差异有统计学意义(*P<0.05)。说明SARI抑制雌激素诱导的肺腺癌细胞A549Src蛋白的磷酸化。4. Western blotting法检测各组中Akt的表达情况。予雌激素处理后,pAkts473表达增强,相对表达量为2.77Π0.48,而总Akt表达不变；但当过表达SARI后再予雌激素处理,pAkts473表达下调,相对表达量为0.86±0.21,而总Akt表达不变。两组pAkts473蛋白表达量差异有统计学意义(*P<0.05)。说明SARI能抑制雌激素诱导的肺腺癌细胞A549Akt蛋白的磷酸化。5. Western blotting法检测各组Erk蛋白的表达情况。予雌激素处理后,pErk蛋白表达增强,相对表达量为3.48±0.47,而Ekr2总蛋白表达不变；但当过表达SARI后再给予雌激素处理,pErk表达下调,相对表达量为0.91±0.09,而Ekr2总蛋白表达不变。两组pErk蛋白表达量差异有统计学意义(*P<0.05)。说明SARI抑制雌激素诱导的肺腺癌细胞A549Erk蛋白的磷酸化。综合以上实验结果,说明SARI抑制肺腺癌细胞中雌激素诱导的Src-Akt-Erk信号通路的活化。结论1.在肺腺癌A549细胞中,SARI极低表达。当将pcDNA-SARI转染入A549细胞,pcDNA-SARI组SARI蛋白表达明显增强,成功在A549细胞中过表达SARI。2.雌激素促进肺腺癌细胞的增殖,SARI不仅能抑制肺腺癌细胞的增殖,而且能抑制雌激素诱导的肺腺癌细胞增殖。3.雌激素促进肺腺癌增殖其相关机制可能与雌激素激活Src-Akt-Erk信号通路有关。SARI毙够抑制雌激素诱导的肺腺癌细胞增殖,潜在的机制可能是通过抑制肺腺癌细胞中Src-Akt-Erk信号通路活化。本研究不仅丰富了我们对雌激素促肺癌增殖作用的分子机制的认识,也促进对SARI抑制肺癌生长增殖相关机制的认识,为SARI成为肺癌治疗分子靶点提供一些理论依据。但目前只是初步研究,临床的应用尚需要大量研究进一步证实。