【摘 要】
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背景:仅次于恶性肿瘤和心脑血管疾病,不孕不育是危害人类健康的第三大疾病,其中一半的原因是由男性所致。畸形精子症是导致男性不育的重要原因之一,无头精子症是一种罕见而严重的畸形精子症。无头精子症患者除不育以外无其他临床症状,精液中主要是无头的精子尾,伴有少量无尾的精子头和少量头尾连接异常的精子。因为无头精子症发生在近亲婚配家系或存在家族聚集现象,提示无头精子症与遗传相关。目前在人类中鉴定的无头精子症致
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背景:仅次于恶性肿瘤和心脑血管疾病,不孕不育是危害人类健康的第三大疾病,其中一半的原因是由男性所致。畸形精子症是导致男性不育的重要原因之一,无头精子症是一种罕见而严重的畸形精子症。无头精子症患者除不育以外无其他临床症状,精液中主要是无头的精子尾,伴有少量无尾的精子头和少量头尾连接异常的精子。因为无头精子症发生在近亲婚配家系或存在家族聚集现象,提示无头精子症与遗传相关。目前在人类中鉴定的无头精子症致病基因有SUN5,PMFBP1,BRDT,HOOK1,TSGA10,DNAH6,CEP112和SPATC1L,但仍有部分患者病因不明,因此鉴定新的致病基因或新的突变位点对无头精子症的诊断与治疗具有重要意义,也有利于阐明精子颈部的结构。方法:研究对象来自安徽医科大学第一附属医院妇产科生殖中心门诊就诊的5名无头精子症患者和1名患者精液中存在无头精子。这6名患者仅有不育的症状,其余各项临床检查结果均在正常范围内。首先提取5名患者的外周血DNA,对无头精子症的致病基因SUN5和PMFBP1的外显子进行PCR扩增和Sanger测序。对未发现这两个基因突变的患者进行全外显子测序,通过SIFT,Polyphen-2和Mutation Taster预测工具筛选致病基因,并且在gnom AD和Ex AC等数据库检测该突变发生频率。再对患者家系验证遗传共分离,对不符合孟德尔遗传定律的患者家系进行q PCR检测基因片段缺失或重复,全基因组测序明确断裂位点。其次通过蛋白印迹和免疫荧光实验检测患者精子中突变蛋白表达和定位改变,构建点突变体和minigene质粒并转入HEK293T细胞,分别分析对表达水平和转录水平的影响。透射电镜用于检测精子鞭毛的超微结构变化。通过CRISPR-Cas9技术构建Cep250基因敲除小鼠模型,进一步研究CEP250在精子发生过程中的作用。结果:(1)在三个家系中鉴定三个SUN5突变,其中1个新的纯合错义突变(c.775G>A;p.G259S)、1个已知的剪切突变位点(c.340G>A;p.G114R)和1个复合杂合突变,其中包括了1个大片段缺失(117-kbp)和已知的错义突变位点(c.1043A>T;p.N348I);通过q PCR实验推测在SUN5中存在片段缺失隐性遗传于其父亲,并且WGS明确了断裂位点(GRCH37/hg19_chr20:31486169-31604149);蛋白印迹和免疫荧光实验证明患者精子中突变的SUN5的表达量明显下降。体外实验证明突变的SUN5在HEK293T细胞中明显降解,并且泛素化蛋白酶体抑制剂(MG132)可抑制了突变SUN5的降解。家系1中患者经过ICSI治疗后获得良好辅助生殖治疗结局。(2)通过WES在家系4(非近亲婚配家系)中鉴定了TSGA10的一个新的剪切突变(NM_025244:c.1108-1G>T),q PCR实验推测患者中存在TSGA10的片段缺失,并且WGS明确了断裂位点(GRCH37/hg19_chr2:99573953-100558346)。蛋白印迹和免疫荧光实验证明患者精子中TSGA10的表达量明显下降。构建minigene转染HEK293T细胞中,验证TSGA10剪切突变导致转录水平发生异常。(3)通过WES在家系5(近亲婚配家系)中鉴定了AK7的一个新的纯合错义突变(NM_152327:c.1846G>A;p.E616K),蛋白印迹和免疫荧光实验证明患者精子中AK7的表达量明显下降,并且透射电镜显示患者的精子鞭毛的外周二联管存在部分缺失,患者经过两次ICSI治疗后没有获得良好的辅助生殖治疗结局。(4)通过WES在家系6(近亲婚配家系)中鉴定CEP250的一个新的纯合移码突变(NM_007186:c.4710_4723del:p.E1570fs*39),免疫荧光实验证明CEP250定位在正常人精子的颈部。通过CRISPR-Cas9技术制备Cep250-/-小鼠,发现Cep250-/-仅影响雄鼠生育且睾丸体积明显减小,重量约为野生型的25%,HE染色可见生精小管内生精细胞数目明显减少,未见圆形精子和成熟精子。蛋白印迹实验证明SYCP3和γH2A.X蛋白在Cep250-/-雄鼠睾丸内表达明显下降,推测Cep250-/-雄鼠表现为精原细胞阻滞。结论:(1)拓展了无头精子症致病基因SUN5和TSGA10的基因突变谱,推荐WGS作为检测SUN5和TSGA10中的杂合性缺失;(2)拓展了AK7的突变谱和表型谱,为患者精确诊断和辅助生殖治疗策略提供参考价值;(3)新鉴定的无头精子症致病基因CEP250,初步探索CEP250在人类和小鼠中的精子发生过程中的作用。
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背景严重烧伤所面临的死亡风险一直是医学治疗上的一大难题;而严重烧伤后出现的肝脏损伤及功能障碍是影响患者预后的早期危险因素之一。然而严重烧伤所致的肝损伤的潜在机制仍是不明确的。甘草酸是从天然草药--甘草的根部所提取出的对肝脏有确切保护作用的成分,甘草酸二铵作为甘草酸类制剂的第三代产品,在临床上常被用于保肝。但其是否能改善严重烧伤所致的肝损伤,目前仍是未知的。因此,本实验着重于探讨甘草酸二铵对严重烧伤
在生活中,我们得到的图像往往被噪声和阴影扭曲或污染,造成图像边界模糊。对于给定的图像,活动轮廓模型将分割过程转换为求解过程中能量泛函的最小值,但其迭代过程比较复杂。针对这一问题,Osher等人提出了水平集方法。水平集方法在图像分割方面发展了很多算法,主要分为基于全局的算法和基于局部的算法。基于全局的算法主要考虑图像的全局信息,因此,它的分割速度较快且适用于分割强度较均匀的图像。但是对于强度不均匀的
研究目的本研究旨在探讨MMP-8在脓毒症中血管内皮细胞ICAM-1表达和中性粒细胞粘附中的作用和初步分子机制。方法1.从安徽医科大学第一附属医院ICU招募6例成人脓毒症患者,从体检中心招募5名成年健康对照者,采集血液标本,分离保存血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中MMP8蛋白的表达。2.以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为研究对象,分组如下:空白对照组、正常血清组、脓毒症血清组、
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深度学习可解释性问题的突破对于AI技术在国防科技等诸多领域的应用具有显著影响。而在物联网技术高速发展的时代,传感器设备在现代社会生活中必不可少。为此本文使用深度学习的方法实现多种基于惯性传感器的运动轨迹识别任务,并通过从事前可解释性建模和事后可解释性分析两个方面,对深度学习模型展开可解释性分析。惯性传感器因为较大的测量误差而难以应用于精准的运动轨迹还原任务,但其能够单独实现数据采集,并具有体积小、
从概率论的角度,滤波问题的最优解表现为待估计的状态关于观测数据的后验概率密度。针对非线性滤波估计问题,贝叶斯递推滤波提供了上述概率论意义下的最优解。但贝叶斯递推滤波涉及到高维积分和反函数的雅可比矩阵计算问题,这使得它的实际计算难以有解析表达式,数值计算也非常复杂。Monte Carlo方法是求解这类问题的一个有效途径。可以用序贯Monte Carlo的方法得到随时间递推的后验概率密度函数的样本集,
背景:大多数烧伤是由热力引起的,包括烫伤和火灾,少数是由接触化学品、电、紫外线辐射和电离辐射引起的,特别是热力(如热水、热油)损伤后,皮肤的黏膜保护屏障被破坏,严重的患者还会直接造成黏膜下损伤,如肌肉等。严重烧伤还会造成很多器官的损伤,肝脏是其中受损较为严重的器官之一。脂肪酸结合蛋白(FABP)最初由美国一位科学家发现,主要存在于哺乳动物的脂肪组织、心肌和肝脏等组织。其中脂肪酸结合蛋白4是研究最为
目的:在早发性卵巢功能不全患者中筛查HELQ基因可能存在的遗传变异,对于前期已发现的HELQ基因隐性纯合突变进行功能机制研究,以探索其在早发性卵巢功能不全发病中的作用机制。方法:收集我中心确诊为早发性卵巢功能不全(Premature ovarian insufficiency,POI)的患者50例,详细记录临床资料、留取其外周血。利用Sanger测序验证患者是否携带HELQ基因的新发变异。提取患者