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本论文初步调查了兽医临床分离沙门氏菌的耐药状况及其携带整合子和耐药基因的情况,旨在为降低该菌对养殖业的危害、减少耐药性传播、指导临床合理用药提供理论依据。
采用微量稀释法测定了16种常见抗菌药物对174株动物源沙门氏菌(猪源22株,鸡源152株)的最小抑菌浓度。结果表明:174株动物源沙门氏菌对SMZ(磺胺甲噁唑)和TMP(三甲氧苄氨嘧啶)耐药率最高,耐药率分别为94.25%和90.80%,其次是四环素、链霉素、氨苄西林、环丙沙星和氯霉素,耐药率分别为52.30%、32.18%、17.24%、11.49%和10.35%;对头孢噻呋、氟苯尼考、庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星、安普霉素、新霉素和黏菌素的敏感率均超过90%,对头孢曲松的敏感率为100%。90%以上菌株同时耐两种或两种以上的药物,以同时耐SMZ、TMP和四环素的耐药谱最多。选择17株多重耐药沙门氏菌(耐5种抗菌药或5种以上),采用PCR方法扩增检测Ⅰ类、Ⅱ类整合酶、整合子及其他27种耐药基因并测序鉴定。结果16株菌检测到Ⅰ类整合酶基因;13株菌扩增到基因盒插入区,整合子大小(基因盒插入区的大小)介于1850bp~2030bp;所有基因盒阳性菌株均检测到qacE△1基因,没有检出Ⅱ类整合子;β-内酰胺类耐药基因以TEM型为主;检测到6种氨基糖苷类耐药基因,其中以aac(3)-Ⅱ的检出率(14株)最高,其次为aadA2(12株)、aph(3)-Ⅶ(11株)、aph(3)-Ⅱ(8株)、ααdA1(3株)和aac(6)-1b(3株);氯霉素类耐药基因cat2(15株);四环素类耐药基因tetA(6株)和tetB(9株);磺胺类耐药基因为sulI(16株)。对16株整合酶阳性菌株进行了接合试验,通过PCR检测鉴定、菌株的生化特征证明有6株菌成功获得接合子。采用微量稀释法测定了6株接合子对部分抗菌药的MIC值,发现接合子对磺胺类药物、链霉素、氯霉素、四环素的MIC值较受体菌有明显升高,部分接合子对卡那霉素、庆大霉素的MIC值也有升高,但所有接合子对氨苄西林的MIC与受体菌比较没有升高。所有接合子均检测到整合酶及整合子基因,说明这些供体菌的整合子位于质粒上,能通过质粒进行接合转移和水平传播。
根据以上研究结果,可以得出以下结论:大多数动物源沙门氏菌对大部分抗菌药较敏感,但对磺胺类药物的耐药性非常严重,对四环素、链霉素、氯霉素、氨苄西林的敏感性也不高;成功建立了检测上述5类抗菌药12种耐药基因的PCR检测方法,多重耐药沙门氏菌的耐药表型与耐药基因型有较高的符合率,整合子-基因盒系统与沙门氏菌的多重耐药性形成有关。