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目的: 1.研究降脂颗粒对高脂饮食(high fat diet,HFD)联合硫酸葡聚糖钠(dextransulfate sodium,DSS)诱导的胆汁酸代谢紊乱的非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)模型小鼠的作用及其潜在机制; 2.研究小檗碱(berberine,BBR)对HepG2细胞胆汁酸相关FXR-SHP信号通路的影响。 方法: 1.体内研究:SPF级的雄性C57BL/6J小鼠,40只,6周龄,20±2g,适应性喂养一周后,随机分为正常组(Control),高脂饮食组(HF)和HF-DSS模型组(HF-DSS),共12周。将造模后的小鼠随机分为HF-DSS模型组(HF-DSS)和降脂颗粒组(JZKL),降脂颗粒灌胃4周后处死小鼠。分别记录和计算各组小鼠的进食量、体重、肝重、肝体比;检测各组小鼠的血清肝酶、TNFα、血脂、血糖和肝脂水平;油红O染色、HE染色和免疫组化染色观察各组小鼠的肝脏组织学变化;检测各组小鼠血清、肝脏和粪便中的胆汁酸代谢谱;RT-PCR和Westernblot法检测肝脏和肠道胆汁酸受体、胆汁酸肠肝循环相关分子、脂质代谢和TLR4/NFκB炎症信号通路相关基因和蛋白的表达。 2.体外研究:分别筛选FXR抑制剂Z-Guggulsterone(Z-GS)和FXR激动剂GW4064干预HepG2细胞的时间和浓度,确定Z-GS(10μM)和GW4064(10μM)分别刺激12小时和24小时,同时以不同浓度的小檗碱(1、5、10、20μM)干预12小时后,RT-PCR法检测HepG2细胞的FXR和SHP的mRNA表达情况。 结果: 1.体内研究 1.1、 HF和HF-DSS饮食均可诱导小鼠肝脏脂质堆积和脂肪变性,且HF-DSS组小鼠肝组织出现明显的淋巴细胞浸润和巨噬细胞活化以及肝酶的明显升高,而HF组没有明显的肝脏炎症和肝酶的升高,提示HF-DSS可成功诱导小鼠形成NASH。 1.2、 HF-DSS诱导的NASH小鼠的血清胆汁酸水平明显降低,肝脏胆汁酸水平明显上升,降脂颗粒干预可调节胆汁酸代谢谱,显著降低肝脏胆汁酸水平,增加血清和粪便中胆汁酸的水平。 1.3、与正常组比,模型组小鼠的肝脏胆汁酸转运相关基因(MDR1A、MDR1B、BSEP、MDR2、MRP2、MRP3、MRP4、OSTβ),肠道胆汁酸转运相关基因(ASBT、 MRP3)和分泌相关基因(MRP2、MDR1A、MDR1B),肝脏胆汁酸重吸收相关基因(NTCP、OATP2、OATP4)的表达明显降低,降脂颗粒可明显降低肝脏胆汁酸合成相关基因和蛋白(CYP7A1、CYP8B1)的表达,增加肝脏胆汁酸转运相关基因(MDR1A、MDR1B、MRP1、MRP4、OSTα、OSTβ)和蛋白(OSTα、OSTβ)的表达以及肠道胆汁酸的分泌相关基因(MRP2、MDR1A、MDR1B)的表达水平。 1.4、与正常组比,模型组小鼠的肝脏FXR-SHP信号通路的基因和蛋白表达明显下降,降脂颗粒干预可增加肝脏FXR-SHP的基因和蛋白表达,同时各组小鼠肠道FXR-SHP信号通路的表达没有明显差异。 1.5、降脂颗粒可降低NASH模型小鼠的肝重、体重、肝体比,改善NASH小鼠的血脂、血糖、血清肝酶、血清TNFα和肝脂水平,改善模型小鼠的肝脏脂肪变性和炎症反应。 2.体外研究 2.1、不同浓度的小檗碱能够增加HepG2细胞FXR和SHP的mRNA表达,且呈明显的剂量依赖关系。 2.2、不同浓度的小檗碱能够扭转FXR抑制剂Z-GS对HepG2细胞的效应。 2.3、不同浓度的小檗碱与FXR激动剂GW4064对HepG2细胞无明显的协同效应。 结论: 1.降脂颗粒能够有效治疗HF-DSS诱导的NASH模型小鼠。 2.调节肝脏FXR-SHP信号通路介导的胆汁酸代谢的肠肝循环,维持胆汁酸代谢的稳态,进而抑制TLR4/NFκB信号通路的活化,可能是降脂颗粒治疗NASH的部分机制。 3.小檗碱能够增加HepG2细胞FXR和SHP的mRNA表达,部分逆转FXR抑制剂Z-GS的效应,且与FXR激动剂GW4064无明显的协同效应。