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急性肺损伤（ALI）是指由心源性以外的各种肺内外致病因素导致的急性进行性缺血性呼吸衰竭，其严重阶段称为急性呼吸窘迫综合征（ARDS），迄今仍无满意的治疗措施，病死率高达50％-70％。革兰氏阴性菌外膜的主要成分脂多糖（LPS）具有明显的致ALI作用，已证实：在炎症反应早期，肺泡中炎性细胞以巨噬细胞为主，其在LPS的激活作用下释放以TNF-α为主的大量前炎症介质，引发失控性炎症反应，由于NF-κB在调控多种炎症性因子基因表达上起重要作用，它与ALI的关系已引起关注。IL-10作为一种免疫抑制因子，可以抑制多种细胞合成炎症介质，具有强有力的抗炎作用，但IL-10具体的抗炎机理尚不清楚。虽然一氧化氮（NO）已被誉为ARDS治疗的重要发展，但其在ALI的炎症机制方面的研究报导尚少。本研究采用兔肺泡巨噬细胞（PAM）体外培养技术，在LPS诱导PAM的基础上，观察IL-10和NO对NF-κB活化及其TNF-α释放的影响，以探讨对ALI/ARDS的治疗前景。 实验方法：用支气管肺泡灌洗（BAL）收集并培养兔PAM，实验分（1）正常对照组（加生理盐水）；（2）LPS组(予LPS 10μg·mL-1刺激)；（3）IL-10+LPS组(予rhIL-10 10 ng·mL-1和LPS 10μg·mL-1同时刺激)（4）SNAP+LPS组(SNAP是NO的供体，予LPS 10μg·mL-1和1nM SNAP同时刺激)。分别于刺激前（0小时），刺激后（0.5、1、2、4小时）留取细胞及细胞培养上清，用凝胶电泳迁移率改变分析（EMSA）法和ELISA法分别检测核提取物中NF-κB活性和细胞培养上清中TNF-α含量。 第四军医大学硕士学位论文一 实验结果：①LPS组于刺激后 0．5斗h内 NF1 B活性和 ITNF…含量均明显高于对照组，尤在 lh达高峰，NF儿 B活性从 658．3士27．8升至 4267．9159．9（Pwto．of），电泳滞后带明显深于对照组，TNF－a含量从 134．if7．8升至 499．9土18．6 pg·InL’（P＜0．of）；②LPS＋n－10组中 NF－。B活性和TNFJ含量虽也高于对照组，但与LPS组相比却有明显的下降，在lh处下降最为显著，NF4 B活性降至 2618．41 148．8 u＜0．of)，电泳滞后带变浅，TNFJ含量降至215．3土6．4 Pg’InL“’；③LPS＋NO组结果与LPS＋IL－10组相似。 结论：①PAM受到 LPS刺激后，NF－K B被迅速活化，可能是 PAM大量释放TNFl等一系列炎症介质5！发ALI的关键环节。②ILJ0与NO通过对 PAM内 NF儿 B活化的抑制，达到减少 TNF0释放的目的，对LPS诱导的AL具有明显抑制作用。