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褪黑素(melatonin,MT)是主要由松果体分泌的一种吲哚胺激素,外周组织如视网膜、胃肠道同样也可自身合成。松果体分泌的褪黑素具有一定的节律性,分泌峰值主要在晚上,因此,褪黑素常作为反映生理节律的标记物。褪黑素功能广泛,可作为过氧化基清除剂,具有调节免疫,抗炎、抗肿瘤、抗衰老等作用。
褪黑素通过与其特异性受体结合,发挥其细胞内作用。应用各种方法检测发现褪黑素受体在大部分组织器官存在结合位点。褪黑素受体(melatonin receptor,MR)可分为高亲和力受体MT1和MT2,以及低亲和力受体。皮肤、胃肠道粘膜及口腔鳞癌组织中均发现MR表达。
唾液是口腔一种混合分泌物,其中含有多种生物活性物质,对维持口腔内环境稳定起重要作用。近年研究发现唾液中存在一定量的褪黑素,但不同唾液中褪黑素含量差异尚不清楚,在口腔中的作用也尚不明了。目的:检测人不同唾液中褪黑素的含量,并观察其昼夜变化,初步探讨不同唾液腺的褪黑素分泌情况;观察褪黑素受体在SD大鼠口腔粘膜的表达情况,初步探寻褪黑素在口腔中的作用可能靶器官。
方法:
①于6:30a.m.、11:30a.m.、18:30p.m.、23:30p.m.四个时间段分别收取12名健康受试者唾液,按照唾液来源分为腮腺液组(PS组)和颌下腺-舌下腺混合液组(SMSLS组),应用酶联免疫吸附法检测人不同唾液褪黑素含量,统计分析并比较二者之间差异。
②取成年SD大鼠,灌注固定后截取其延髓、舌组织、唇颊粘膜、牙周组织及软腭,制作成冰冻切片,用SP免疫组化法检测SD大鼠口腔组织褪黑素受体的表达情况。
结果:
①PS组在6:30a.m.、11:30a.m.、18:30p.m.、23:30p.m.四个时间的褪黑素含量分别为(5.17±0.63)pg/ml、(4.88±0.614)pg/ml、(5.02±0.63)pg/ml、(5.15±0.65)pg/ml,SMSLS组在上述四个时间褪黑素含量分别是(5.97±0.49)pg/ml、(5.92±0.42)pg/ml、(5.96±0.45)pg/ml、(5.86±0.49)pg/ml。PS组与SMSLS组间褪黑素含量均有显著差异,SMSLS组褪黑素含量高于PS组(P<0.05)。各组褪黑素含量在各时间点变化不明显(P>0.05)。
②免疫组织化学法观察到SD大鼠延髓见大量MT1和MT2受体阳性神经元,其受体主要存在于神经元胞浆内,表现为棕褐色或棕黄色阳性颗粒。MT1和MT2受体在SD大鼠舌粘膜、软腭粘膜和牙龈上皮组织中均未见MT1和MT2受体阳性细胞。
结论:
①人腮腺液和颌下腺-舌下腺混合液中均能检测到褪黑素,且颌下腺-舌下腺混合液褪黑素含量明显高于腮腺液。
②人腮腺液和颌下腺-舌下腺混合液中褪黑素含量均无昼夜变化。
③SD大鼠舌粘膜、软腭粘膜和牙龈上皮细胞中均未见MT1和MT2受体表达。