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目的：白血病细胞耐药和复发仍然是目前阻碍患者长生存的主要原因，特别是对于老年和一般情况较差无法耐受强化疗的患者。表观遗传学药物为这些患者带来了新的治疗方法。目前常用的药物为DAN甲基转移酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂。地西他滨（decitabine,DAC)为DNA甲基转移酶抑制剂，能够抑制DNA甲基转移酶的活性，逆转抑癌基因的异常甲基化，从而使沉默的抑癌基因激活，使白血病细胞恢复正常的分化和凋亡。地西他滨疗效肯定，同强化疗相比，安全性强，治疗相关死亡率低，是治疗白血病的新选择。现有研究表明组蛋白乙酰化药物能够干扰细胞周期、诱导细胞分化和凋亡，且发现其与DNA甲基转移酶抑制剂具有协同抗白血病作用。丙戊酸钠(Valproic acid,VPA)是传统的抗癫痫药物，近年发现其具有组蛋白去乙酰化转移酶的抑制作用，能够诱导白血病细胞凋亡。本实验以U937白血病细胞为研究对象，观察地西他滨联合丙戊酸钠对U937细胞的增殖抑制和促凋亡作用，并研究DAC对DNA甲基转移酶和抑癌基因P15在mRNA水平的影响，初步探讨药物的作用机理.方法：1常规培养人白血病细胞株U973，取对数生长期的细胞进行实验；2MTT法检测DAC、VPA及两药联合对U937细胞的增殖抑制；DAC的浓度分别为0.1、0.8、1.6mmol/L；VPA的浓度分别为1.0、3.0、5.0mmol/L；DAC(0.8mmol/1)联合VPA(1.0、3.0、5.0mmol/L)分别作用于U937细胞24、48、72小时，MTT检测细胞增殖抑制率。3AnnexinV/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡:终浓度为0.1、0.8、1.6mmol/L的DAC，终浓度为1.0、3.0、5.0mmol/L的VPA及DAC(0.8mmol/1)联合VPA(1.0、3.0、5.0mmol/L)分别作用于U937细胞72小时，PI染色，流式细胞仪检测细胞凋亡4PI染色流式细胞术检测细胞周期变化；DAC浓度分别为0.1、0.8、1.6mmol/L作用于U937细胞72小时，PI染色、流式细胞仪检测细胞周期变化。5RP-PCR检测DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3B及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子P15mRNA表达水平的变化:检测药物处理前后细胞目的基因mRNA表达的变化。6SPSS16.0软件分析，分组资料以均数±标准差表示，两组比较应用T检验方法，多组比较应用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。结果：1DAC、VPA及两药联合对U937细胞增殖的影响随着药物浓度的增加和作用时间的延长，DAC对U937细胞的增殖抑制率由10.1%增加到67.0%，各组进行统计学分析P<0.05，差异具有统计学意义；VPA的细胞增殖抑制率由17.6%增加到61.8%，各组进行比较显示，VPA在5.0mmol/L时，48小时的增殖抑制率与24小时及72小时的增殖抑制率之间的差别无统计学意义（P>0.05），VPA浓度在1.0、3.0mmol/L时各组间抑制率有明显差异（P<0.05）；联合用药组细胞的最大增殖抑制率为89.2%，联合用药组之间比较差异具有统计学意义（P<0.05）。U937细胞的增殖抑制率均随着药物浓度增加和药物作用时间延长逐渐增加。通过国内金氏公式计算，24h、48h、72h的Q值0.983、1.042、0.943；1.079、1.277、1.208；1.189、1.254、1.137。提示两药联合有协同相加作用。2DAC、VPA及两药联合对U937细胞凋亡的影响DAC作用72小时U937细胞的凋亡率由13.17%增加到30.53%，显示细胞凋亡率随药物浓度增加而增加,明显高于对照组（P<0.05）；VPA作用后细胞的凋亡率由28.61%增加到47.30%，细胞凋亡率呈剂量依赖性,各组比较（P<0.05）；DAC联合VPA作用于U937细胞的凋亡率明显高于单药组，细胞凋亡率最高可达68.40%，各组比较（P<0.05），结果显示两药联合具有协同促凋亡作用。3DAC作用72小时U937细胞周期变化DAC主要作用于S期细胞，随着DAC药物浓度的增加，U937细胞G0/G1期比例逐渐增加，由50.85%增至68.9%，S期比例逐渐减少，由47.78%减至28.11%。各组进行统计学分析P值均<0.05，差异具有统计学意义。4RT-PCR检测DNMT1、DNMT3A、DNMT3B及P15mRNA表达水平的变化未使用药物处理前DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3BmRNA在U937细胞中均有表达，而P15mRNA在U937细胞中没有表达，DAC作用72小时DNMT1和DNMT3AmRNA表达量减少并随药物浓度的增加表达量逐渐减少,DNMT1mRNA的表达量由6.012减至0.521，DNMT3AmRNA的表达量由5.039减至0.628(P<0.05)，P15mRNA经DAC作用后出现表达并随药物浓度增加而增加，DAC使P15mRNA的表达量由无增至2.078，且VPA能够增强DAC激活P15mRNA表达的作用，两药联合应用使P15mRNA的表达量增至3.911(P<0.05)。DNMT3BmRNA在DAC作用72小时后表达量均没有变化(P>0.05)。结论：1DAC、VPA对U937细胞均有显著的细胞增殖抑制，并且两药具有协同作用。2DAC、VPA对U937均有促凋亡作用，并且两药具有协同作用；3DAC减少S期U937细胞，增加G0/G1期细胞；4DAC的作用机制与抑制DNMT1mRNA和DNMT3AmRNA的表达和激活P15mRNA的表达有关，且VPA能够增强DAC促进P15mRNA的表达。