三氯化铝对鸡脾淋巴细胞毒性的体外研究

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以体外培养1月龄伊莎蛋雏鸡脾脏淋巴细胞为研究对象,在培养液中添加不同浓度的三氯化铝(AlCl3),对照组添加相同体积的培养液,应用MTT比色法、放免法、半定量RT-PCR和流式细胞术等方法观测铝对鸡脾脏淋巴细胞活性、细胞增殖、免疫细胞因子、抗氧化功能、钙稳态及细胞凋亡等的影响,旨在探讨铝对鸡免疫细胞毒作用及其机制,为铝毒危害的解除提供理论依据。研究结果表明:1应用台盼蓝排斥试验和MTT比色法测得染铝24h后鸡脾脏淋巴细胞的半数抑制浓度(IC50)为0.832±0.01 mg/ml。2经MTT比色法测得低剂量铝能明显抑制T细胞增殖,对B细胞增殖不起作用,高剂量铝对T、B细胞增殖均起抑制作用。3铝可增加淋巴细胞内乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率,导致细胞活性下降,说明铝可改变淋巴细胞膜通透性。4染铝组脾淋巴细胞培养液中白介素-2(IL-2)和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量低于对照组,组间差异显著或极显著(p<0.01;p<0.05),且染铝浓度和它们的含量呈负相关,提示IL-2和TNF-α含量的减少可能是铝致免疫毒性的机理之一。5染铝组鸡脾淋巴细胞内一氧化氮合酶(NOS)活性、一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)含量高于对照组,超氧化物岐化酶(SOD)和谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)活性低于对照组,组间差异显著或极显著(p<0.01;p<0.05),且呈现剂量-效应关系。说明铝可引发鸡脾脏淋巴细胞氧化胁迫,进而发挥其免疫细胞毒作用。6应用流式细胞术和吖啶橙-溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色法分别从生化改变和形态学角度检测了铝致鸡脾脏淋巴细胞凋亡情况。随染铝浓度的增加,淋巴细胞膜皱缩、出芽、胞浆稀少、染色体固缩、边聚、碎裂等典型凋亡特征的细胞数逐渐增多;G0/G1期细胞数量逐渐增加,S和G2/M期细胞数量逐渐减少,细胞增殖指数降低;凋亡指数和细胞凋亡率升高,染铝组与对照组间比较差异均极显著(p<0.01)。表明铝可通过诱导免疫细胞凋亡发挥免疫毒性作用。7随染铝浓度的增加,淋巴细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)逐渐升高,钙调蛋白(CaM)mRNA表达减少,与对照组比,差异显著或极显著(p<0.05;p<0.01)。表明铝可致淋巴细胞钙稳态失衡。
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