【摘 要】
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鲁西黄牛是我国重要的濒危物种之一,构建鲁西黄牛的cDNA文库对于鲁西黄牛遗传资源的保存以及牛基因功能的研究具有重要意义。本研究为构建鲁西黄牛cDNA文库和胸腺肽β4(Tβ4)
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鲁西黄牛是我国重要的濒危物种之一,构建鲁西黄牛的cDNA文库对于鲁西黄牛遗传资源的保存以及牛基因功能的研究具有重要意义。本研究为构建鲁西黄牛cDNA文库和胸腺肽β4(Tβ4)基因的原核表达载体,首先由实验室提供的鲁西黄牛耳缘组织成纤维细胞中提取总RNA,采用SMARTTM技术成功构建了鲁西黄牛耳组织cDNA文库。所构建的鲁西黄牛耳组织cDNA文库未扩增文库滴度为2.88×106pfu/mL,扩增后文库的滴度为1.33×1010 pfu/mL。从扩增文库中随机挑取96个克隆进行了PCR电泳鉴定,结果表明重组率为92.7%,插入片段平均大小为1.0Kb。然后利用构建好的鲁西黄牛耳组织cDNA文库,以噬菌体转化为质粒的方法筛选出Tβ4基因,成功构建了Tβ4基因的原核表达载体pGEX-4T-1-Tβ4,并设置诱导剂IPTG的浓度梯度进行诱导表达,用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测pGEX-4T-1-Tβ4融合蛋白的表达。结果显示,与对照组相比,实验组在32KD左右的位置出现Tβ4融合蛋白的表达带,表明Tβ4基因在BL21菌中表达成功。本试验为进一步研究Tβ4基因的生物学功能奠定了基础。
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