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CD40是分子量48～50KD的Ⅰ型跨膜糖蛋白,属肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族成员。CD40广泛表达于许多类型细胞表面,包括不同发育和分化阶段的B淋巴细胞、单核细胞、树突状细胞、造血前体细胞和内皮细胞以及一系列肿瘤细胞等。CD40是免疫应答中关键性的共信号分子,其与配体(CD40L)的相互作用提供T、B细胞活化所必需的第二信号。CD40分子可介导B细胞的增殖、分化、抗体的分泌和类型转换;树突状细胞的激发、分化和成熟;T淋巴细胞的活化及细胞免疫功能的调节;内皮细胞粘附分子的改变,炎症因子的释放,白细胞在炎症部位的聚集等。 近年研究表明,多种疾病的发生发展均与CD40分子相关,如自身免疫性疾病、传染性疾病、移植排斥、肿瘤及动脉粥样硬化等。运用阻断型CD40L抗体在动物模型上可以显著延长移植器官的生存,但仍然存在副作用和安全性的问题,而直接阻断CD40分子的治疗策略有望能改善其缺点。最近发现CD40分子除了膜型的形式还存在着可溶性的形式—sCD40,膜型的CD40分子经金属蛋白酶(MP)裂解,释放至液相成为sCD40,可阻断膜型CD40和CD40L的相互作用,负反馈调节免疫应答。这种可溶性形式的CD40分子在肾脏和肝脏疾病患者的血清中的浓度远高于正常人,和这些疾病的发生、发展有密切的相关性。目前关于CD40阻断型抗体和sCD40方面的报道甚少,基于我室已经成功研制了激发型CD40单克隆抗体,研制识别位点不同、功能不同的阻断型CD40单抗以及sCD40 ELISA试剂盒将在肿瘤、移植排斥反应和自身免疫性疾病中具有重要的理论研究和临床应用价值。 本研究以高表达CD40分子的XG2细胞株为抗原,应用SP2/0作为亲本骨髓瘤细胞,采用细胞融合、单克隆抗体筛选、荧光标记、免疫印迹和竞争抑制等方法获得并建立了一株持续分泌特异性鼠抗人CD40单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株,命名为3G3。经体外长期传代培养、液氮冻存半年以上复苏良好,分泌抗体的性能稳定。 杂交瘤细胞经体外扩大培养,诱导同种小鼠产生的腹水型单抗,经Protein G纯