背景:风疹病毒是一种全球性传染,给人类健康带来极大危害的病原体,人是其唯一宿主。曾经许多国家,包括澳大利亚、美国、日本及中国等都爆发过风疹流行。虽然在发达国家风疹目前几乎被实施的疫苗计划免疫所消灭,但在免疫项目开展不好的国家(尤其是发展中国家),风疹仍在流行,极大地威胁着人类健康和人口素质的提高。追溯历史,风疹病毒的检测经历了形态学、血清学、Dot-blot、Liquid、Slot 杂交技术及 PCR 技术等发展阶段,但这些方法均未取得较好的效果。风疹病毒的定量检测,成为众多学者研究的重要内容。 目的:建立一种能广泛应用于临床的快速、简便、敏感、特异的风疹病毒定量检测方法;准确反映体内病毒复制情况,为探讨病毒感染量与致病性关系,以及为临床治疗提供科学依据。 方法:利用 RT-PCR 方法扩增并回收 RV BR1 株包膜糖蛋白 E1 的基因片段,将其与 pMD18-T 载体连接,经氨苄青霉素筛选、酶切鉴定,以获得 RV E1 蛋白基因的克隆质粒。将此质粒用 752 分光光度仪定量,做对数关系稀释;以 FAM 作为荧光指示剂,进行实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)。以不同对数关系的稀释浓度和相应的阈值循环数(Ct)为相应的 X、Y 轴,绘制标准曲线。然后用我们所建立的方法