研究背景和目的肝细胞癌是肝脏最常见的恶性肿瘤。大多数晚期肝细胞癌患者伴有体内转移,预后较差。细胞外囊泡（Extracellularvesicles,EVs）是一类广泛参与多项生物学过程的纳米级小囊泡。近年来多项研究证实肝细胞癌来源EVs及其所携带的mRNA、非编码RNA和蛋白质等内容物对于调控肿瘤生长和肿瘤转移具有重要作用。肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基2（Actin-relatedprotein complex subunit2,ARPC2）介导肌动蛋白网络的形成,对于细胞的迁移侵袭具有关键的调控作用。本研究主要目的为探讨肝癌细胞来源EVs介导的ARPC2对肝癌发展和转移的相关作用,为肝癌的诊断、治疗和预后监测提供一个新方向。研究方法第一部分采用超速离心法收集人转移性肝癌细胞系MHCC97L、MHCCLM3和人正常肝细胞系MIHA来源的EVs进行蛋白质组学分析。通过分析各组EVs蛋白表达差异,选择ARPC2作为进一步的研究对象。免疫印迹法检测ARPC2在各细胞系蛋白和EVs中的表达,并分析临床上ARPC2的表达与肝细胞癌的相关性。第二部分通过体外平板克隆形成实验、Transwell迁移侵袭实验和裸鼠尾静脉肺转移模型探究ARPC2抑制剂Pimozide是否影响人转移性肝癌细胞系来源EVs的对低表达ARPC2细胞系的促瘤能力。第三部分构建ARPC2基因敲除的MHCC97L单克隆细胞株,收集EVs并通过平板克隆形成实验、Transwell迁移侵袭实验等体外实验和裸鼠尾静脉肺转移模型探究EVs介导ARPC2对低表达ARPC2细胞系增殖、迁移和侵袭能力和肝癌肺转移的影响。研究结果第一部分ARPC2在人转移性肝癌细胞系的细胞蛋白和EVs中高度表达;而在人正常肝细胞系和人非转移性肝癌细胞系的细胞蛋白和EVs中表达较低。TCGA数据库分析ARPC2在肝癌组织中高度表达;且ARPC2过表达与肝细胞癌的肿瘤分期相关。生存分析显示高表达ARPC2的肝细胞癌患者总生存期缩短。第二部分APRC2抑制剂Pimozide抑制人转移性肝癌细胞系来源EVs促低表达ARPC2细胞系增殖、迁移和侵袭的能力;同时抑制人转移性肝癌细胞系来源EVs促肝细胞癌肺转移的作用。第三部分人转移性肝癌细胞系MHCC97L基因敲除ARPC2后,其增殖、迁移和侵袭能力显著下降。肝癌细胞来源EVs介导的ARPC2具有教化低表达ARPC2细胞恶性转变以及促肝细胞癌肺转移的作用。研究结论本研究首次揭示肝细胞癌EVs介导的ARPC2具有促进细胞的恶性转变和肝癌肺转移的作用;且高表达ARPC2与肝细胞癌的进展及患者不良预后具有密切的相关性,提示ARPC2或为肝细胞癌潜在的致病基因。ARPC2或为肝细胞癌诊断、治疗和预后监测的新靶标,为晚期肝细胞癌伴转移的患者带来新的希望。