板栗短雄花序芽变AFLP分析及SCAR标记

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板栗(Castanea mollissima Bl.)是中国广泛栽培的树种之一,本研究中的短雄花序板栗是一种新的种质资源,对板栗的育种工作具有重要的研究意义,国内外鲜有报道。本研究以短雄花序芽变和普通板栗为材料,通过AFLP、SCAR分子标记技术对雄花序短小这一特殊性状进行分析,研究主要结果如下:(1)AFLP及其相关技术的优化本研究对AFLP及其相关实验技术进行了优化。高质量的DNA是试验的关键,本研究中采用改进的CTAB法50ml大量提取,得到的DNA沉淀呈丝状透明,极易溶解于TE中。改进的方法得出的OD260/OD280约1.8左右,能够满足AFLP操作对模板DNA的要求。同时还对银染体系做了优化,使显影效果更为理想。(2)板栗短雄花序芽变的AFLP分析利用AFLP分子标记技术对板栗短雄花序芽变及其母株进行了研究,72种引物组合共产生5130条清晰谱带,多态性位点68个,多态性1.93%,相似性指数99.04%,差异片段主要集中于300~900bp之间,研究表明短雄花序芽变和对照个体之间的变异与遗传物质的改变相关,其中的一些可能与雄花序变短的基因有关。(3)克隆测序及SCAR标记的转化将引物组合E-ACT/M-CTT扩增的差异片段进行回收、克隆及测序分析,表明差异片段CF1与水稻同源性为44.1%,其中相似区域的共同特征是编码逆转座子蛋白,转座的遗传效应是导致基因重排、插入、缺失的重要因素,有助于功能基因组学的研究。此外,根据测序结果设计特异引物,将片段SF5转化为共显性的SCAR标记,可以为苗木的鉴定提供了早期预测。
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