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目的:本研究为前期本实验室将异体同种骨髓间充质干细胞(Bone marrowmesenchymal stem cells BMSCs)悬液经山羊颈静脉注射致急性肺栓塞发生故设计探索性的实验,目的在于比较4℃恒温条件下短期保存对小鼠骨髓间充质干细胞(C57-BMSCs)的细胞活性及生物学特性是否产生影响,为短期安全有效的保存BMSCs提供参考,探索使用DNA酶Ⅰ(DeoxyribonucleaseⅠ DNaseⅠ)预处理后的注射用BMSCs经尾静脉注射至同种异体小鼠体内的移植方式,能够起到降低直接血管内移植导致发生急性肺栓塞的风险。为将来在临床或口腔组织工程领域应用提供安全性参考。方法:(1)体外无菌分离培养纯化C57-BMSCs,鉴定BMSCs的骨向、脂向分化能力,经流式对其的表面分子标志物表达程度检测。(2)磷酸盐的缓冲液(PhosphateBuffered Saline PBS)作为C57-BMSCs的短期储存液,直接将BMSCs置于4℃恒温保存,存储0h、4h、12h、24h及48h后取试样,镜检细胞、测算统计活细胞比例、比较增殖和分化能力。(3)对正常C57-BMSCs和DNaseⅠ预处理后C57-BMSCs悬液细胞聚集状态及体外增殖、分化能力进行比较。(4)将体外分离、培养、纯化后的C57-BMSCs扩增至第三代。将C57小鼠随机分为四组:注射PBS组(n=30)、注射10U/mlDNaseⅠ-PBS组(n=30)、注射正常C57-BMSCs组(n=30)、注射DNaseⅠ预处理后C57-BMSCs组(n=30)。(5)注射PBS组与注射正常C57-BMSCs组每只小鼠以5ml/kg的比例,分别经尾静脉注射相应剂量的PBS或本实验室前期试验摸索得到(3×106cell)的临界致死剂量C57-BMSCs,取急性死亡小鼠脏器做组织学检测,注射PBS组做对照,观察记录并统计急性死亡率。(6)注射DNaseⅠ预处理后C57-BMSCs组,每只小鼠按5ml/kg比例注射DNaseⅠ预处理后3×106个C57-BMSCs观察急性死亡率。结果:(1)于4℃恒温条件下短期保存C57-BMSCs4h、12h和24h后取样镜下观察见良好的形态、活细胞占80%左右,细胞增殖、分化能力上相比于0h无统计学意义(P>0.05);48h取样后镜下见悉数视野的死细胞和细胞碎片、仅20%左右为活细胞,与0h相比细胞增殖、分化能力上存显著性差异(P<0.05)。(2)DNaseⅠ预处理不影响C57-BMSCs增殖、分化能力(P>0.05);DNaseⅠ预处理C57-BMSCs与正常C57-BMSCs相比细胞聚集成团比例显著降低(P<0.05)。(3)与注射PBS组相比,注射正常C57-BMSCs组的急性死亡率是60%、组织学检测发现心肺异常并且肺血管内有异染物质,诱发了急性肺栓塞。(4)注射DNaseⅠ预处理后C57-BMSCs组的急性死亡率降为23.3%,与注射正常C57-BMSCs组相比有统计学差异(P<0.05)。结论:(1)4℃恒温条件下24h内短期保存C57-BMSCs为一种简单易行的保存方法。但是,细胞生物学特性与活性随保存时间延长是呈逐渐下降的,并直至丧失。(2)DNaseⅠ预处理不影响C57-BMSCs的生物学特性,DNaseⅠ能够降低经静脉注射移植C57-BMSCs悬液中单个细胞间聚集所诱发急性肺栓塞风险的发生。为将来临床或口腔组织工程领域的应用提供了一定的安全性参考。