离子液体体系下修饰纤维素酶降解纤维素的研究

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本文设计合成了7种中碱性离子液体,利用FT-IR、1H-NMR和13C-NMR等表征技术确定了其结构。筛选出一种对纤维素酶有良好生物相容性的新型离子液体-1-羟乙基-3-甲基咪唑醋酸盐[C2OHmim][OAc]。采用XRD、SEM、FT-IR和TG/DTA等技术手段对离子液体溶解前后的纤维素结构形貌惊醒了表征,结果表明,离子液体溶解后的纤维素结构松散,结晶度下降,稳定性降低。分别采用分子量5000的单甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺(mPEG-MAL5k)、分子量5000的单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺(mPEG-SPA5k)和分子量5000、10000、20000的单甲氧基聚乙二醇丙醛(mPEG-ALD5k、10k、20k)对商品级纤维素酶(Cellulase)进行化学修饰。制备了五种修饰纤维素酶,分别标记为Cell-ALD5k、10k、20k,Cell-SPA5k和Cell-MAL5k。以Cell-ALD5k为例,详细考察修饰温度、修饰反应时间、修饰体系pH、纤维素酶浓度和修饰剂与纤维素酶的质量比等修饰条件对修饰纤维素酶催化活性的影响,确定最佳修饰条件。考察了修饰酶在[C2OHmim][OAc]中稳定性和催化活性,结果表明修饰酶在离子液体中稳定性和催化活性明显提高。在纤维素/[C2OHmim][OAc]均相溶解体系中,研究天然纤维素酶和五种修饰纤维素酶对微晶纤维素的原位降解。采用DNS显色法检测15%(w/v)的[C2OHmim][OAc]-缓冲溶液酶解体系中得到的还原糖浓度,以表征酶解效果。发现Cell-ALD5k在15%(w/v)的[C2OHmim][OAc]-缓冲溶液酶解体系中对微晶纤维素的降解效果最好,24h后还原糖量达到3.94mg/mL,转化率达到93.8%。将其应用于天然纤维素秸秆、滤纸和棉花的降解中,对滤纸的降解效果最佳,24h转化率达到99.5%。在纤维素/[Bmim]Cl(1-丁基-3-甲基咪唑盐酸盐)均相溶解体系中,研究天然纤维素酶和五种修饰纤维素酶对微晶纤维素的原位降解。发现Cell-ALD20k在15%(w/v)的[Bmim]Cl-缓冲溶液酶解体系中对微晶纤维素的降解效果最好,24h后还原糖量达到4.09mg/mL,转化率达到97.4%,可见修饰酶在[Bmim]Cl中仍能保持良好稳定性和催化活性。将其应用于天然纤维素的降解中,对棉花的降解效果最佳,24h转化率达到97.0%。
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