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目的:通过实验观察“柴竭抑肝纤”对肝纤维化大鼠模型各项指标的干预作用,探讨“柴竭抑肝纤”对肝纤维化大鼠PDGF、TGF-β1的影响及其抑制大鼠HSC-T6细胞株活化增殖的机制,从而探讨“柴竭抑肝纤”治疗肝纤维化的可行性,以期为临床治疗肝纤维化提供一种可行的中药复方制剂,为今后临床的广泛运用作出科学评估并提供实验依据。方法:动物实验:SD大鼠60只,雄性,随机分为6组,每组10只。分别为空白组、模型组、阳性组(鳖甲煎丸组)、“柴竭抑肝纤”低、中、高剂量组。除空白组外,其余各组均给予3%硫代乙酰胺(TAA)腹腔注射造模,160mg/Kg,隔日一次,共6周。造模第4周开始,阳性组即予鳖甲煎丸1g/Kg·d(中等剂量)灌胃,“柴竭抑肝纤”低(1.99g/Kg·d)、中(3.98g/Kg·d)、高(7.96g/Kg·d)剂量组分别给予“柴竭抑肝纤”灌胃,共5周。于末次灌胃24小时后,用水合氯醛(生理盐水配制成4%浓度,每100g大鼠注射1ml)轻度麻醉大鼠,留取血清及肝组织,电子称称量肝脏湿重并计算肝脏指数;全自动分析法检测大鼠肝功能指标(ALT、AST、ALP);酶联免疫吸附法检测肝纤维化血清学标志(LN、HA、CIV、PCIII);肝脏切片进行Masson染色,观察肝脏纤维化程度;免疫组化法检测药物治疗后肝脏组织PDGF和TGF-β1的表达变化。细胞实验:HSC-T6细胞株购自于上海细胞库,10%胎牛血清DMEM培养液,37度,5%CO2,饱和湿度。收集对数生长期细胞,接种于96孔板中,每孔5x104个细胞,加入相应浓度的实验药物(溶解于生理盐水后,经0.2um滤膜过滤),药物作用24h后通过CCK-8检测HSC细胞的增殖情况;蛋白印迹(Western Bloting)检测HSC细胞中TGF-β1、α-SMA的表达;流式细胞检测HSC细胞的凋亡情况。结果:(1)大鼠肝纤维化造模:与空白组比较,各给药组大鼠肝脏指数显著增加(P<0.01),与模型组比较,“柴竭抑肝纤”高剂量组降低最明显;大鼠肝脏切片Masson染色显示:模型组肝脏色暗红,光镜下可见肝细胞肿胀、变性及广泛的纤维增生,形成纤维间隔,各治疗组大鼠肝组织炎性病理变化均有不同程度的减轻,纤维组织增生减少,其中以“柴竭抑肝纤”中、高剂量组最为明显。提示模型组与各治疗组均造模成功,阳性药组与“柴竭抑肝纤”各剂量组均可对肝纤维化的发生发展起到不同程度的治疗作用。(2)大鼠血清学检测:全自动分析法检测大鼠肝功能指标,与空白组比较,模型组大鼠血清中ALP、AST、ALT的浓度均显著增加,与模型组比较,各给药组均能不同程度的降低ALP、AST、ALT的浓度(P<0.05),其中以“柴竭抑肝纤”中、高剂量组降低最为明显(P<0.01);酶联免疫吸附法检测大鼠肝纤维化血清学标志,与空白组比较,模型组LN、HA、CIV、PCIII都显著增加,与模型组比较,各给药组LN、HA、CIV、PCIII指标都有显著的降低(P<0.05),其中以“柴竭抑肝纤”高剂量组降低最为明显(P<0.01)。(3)免疫组化法检测药物治疗后大鼠肝脏组织PDGF和TGF-β1的表达变化:与空白组比较,模型组PDGF和TGF-β1均显著增加,与模型组比较,阳性药组和“柴竭抑肝纤”各剂量组均可降低PDGF的表达(P<0.01);阳性药组和“柴竭抑肝纤”中、高剂量均能降低TGF-β1的表达(P<0.01)。(4)细胞实验表明:与空白组比较,200、100、50mg/L浓度的“柴竭抑肝纤”能抑制HSC-T6细胞的增殖(P<0.05);“柴竭抑肝纤”中、高剂量组可下调HSC-T6细胞中TGF-β1的蛋白表达,减少α-SMA蛋白的表达(P<0.05);流式细胞检测显示“柴竭抑肝纤”对HSC-T6细胞凋亡无显著影响。结论:(1)“柴竭抑肝纤”可以明显抑制并减轻TAA诱导的大鼠肝纤维化水平,降低肝脏指数、肝功能指标及肝纤维化指标,具有保护并改善肝脏的作用。(2)“柴竭抑肝纤”通过抑制PDGF、TGF-β1的表达并抑制肝星状细胞的增殖发挥抗肝脏纤维化的作用。