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研究背景:CD4~+T细胞和CD19~+B细胞可以形成CD4~+CD19~+双联体细胞在40年前首次被报道。近年来的研究发现CD4~+CD19~+双联体细胞在调节抗体反应和滤泡辅助性T细胞(follicular helper T,Tfh)的发育过程中发挥重要作用,同时也参与生发中心反应。然而,对于慢性HIV-1感染者的CD4~+CD19~+双联体细胞的特点及其作用的机制研究较少。目的:探讨T-B双联体细胞在HIV-1病毒感染过程中发挥的作用及与疾病进展关系。方法:本研究共入组86例慢性HIV-1感染者,其中未进行抗病毒治疗的典型进展患者66例和抗病毒治疗后完全应答患者20例,同时入组20例健康人作为健康对照。(1)通过流式细胞仪检测CD3~+、CD4~+、CD19~+细胞,分析CD4~+CD19~+细胞群细胞大小(FSC)、细胞核酸量(7-AAD-MFI)及利用流式分选CD4~+CD19~+细胞进行免疫荧光染色共同验证CD4~+CD19~+细胞是T-B双联体细胞。(2)应用流式分选技术获得T-B双联体细胞,进行亚型分析,并通过qPCR检测T-B双联体细胞和CD4~+T细胞的HIV DNA。(3)研磨淋巴结组织获得淋巴细胞并重悬,流式检测淋巴结内T-B双联体细胞与外周T-B双联体细胞p24表达情况。(4)流式检测慢性HIV-1感染者外周T-B双联体细胞绝对数和百分比并分析细胞绝对数与疾病进展的相关性。结果:(1)通过分析比较CD4~+T和CD19~+B细胞和T-B双联体细胞的细胞大小、细胞核平均荧光强度、免疫荧光染色证实CD4~+CD19~+细胞是T-B双联体细胞,分选CD4~+CD19~+双联体细胞解离为CD4~+T和CD19~+B两群细胞进一步证实结果。(2)流式分选获得T-B双联体细胞,解离后表面受体分析结果显示CD32a、CD45RA、CCR7及CXCR5在T-B双联体细胞表面表达显著高于解离后单个T或单个B细胞,亚型分析显示T-B双联体细胞中CD4~+T以na?ve CD4~+T细胞和记忆CD4~+T细胞为主。(3)体外感染实验结果显示T-B双联体细胞p24表达显著高于单个CD4~+T细胞。(4)淋巴结内T-B双联体细胞p24表达显著高于外周T-B双联体细胞。(5)T-B双联体细胞内每百万细胞HIV DNA拷贝数显著高于CD4~+T细胞。(6)与健康对照组比较,慢性HIV-1感染者外周血T-B双联体细胞绝对数和百分比均显著降低,随着CD4~+T细胞数减少T-B双联体细胞绝对数和百分比逐渐减少,尤其以艾滋期患者下降显著,长期治疗后的完全应答患者T-B双联体细胞百分比显著增加,但仍低于健康对照组。(7)典型进展HIV-1感染者T-B双联体细胞绝对数与疾病进展显著相关,表现为T-B双联体细胞绝对数与CD4/CD8值正相关,与HIV-1病毒载量负相关。结论:(1)慢性HIV-1感染者外周血T-B双联体细胞由于高表达淋巴结趋化受体CCR7、CXCR5,推测这群细胞更易于向淋巴结迁移。(2)T-B双联体细胞中CD4~+T细胞相较于外周单个CD4~+T细胞更易感染HIV-1。(3)随着疾病进展,慢性HIV-1感染者T-B双联体细胞绝对数不断减少并与疾病进展相关。