犬弓首蛔虫（Toxocara canis）是野生和家养犬科、猫科动物体内常见的一种肠道寄生性线虫,同时也是世界上被严重忽视的一种人兽共患寄生虫,引起严重的公共卫生健康问题。因此,开展犬弓首蛔虫病流行病学调查及诊断与防控研究在野生动物保护、家养动物健康以及公共卫生方面都具有重要意义。为此,本研究拟通过开展中国部分地区圈养野生动物犬弓首蛔虫病的分子流行病学调查研究,补充和完善其流行病学特征;在此基础上,进一步借助犬弓首蛔虫基因组、转录组、分泌组数据,鉴定和筛选虫体寄生阶段高表达、分泌型的犬弓首蛔虫病早期血清学诊断抗原候选基因（包括TcHSP70AB、TcHSP70C和Tcs HSPOV25）,通过克隆、原核表达以及“犬弓首蛔虫-小鼠感染”模型和结合临床初步测试,评估其重组蛋白的血清学诊断价值。主要试验结果如下:2011年4月至2019年11月,从西南地区3家动物园（贵阳野生动物园、昆明动物园、成都动物园）采集11种圈养野生犬科、猫科动物37个个体蛔虫样本69条（含幼虫虫体10条）。经形态学初步鉴定后,PCR扩增虫体ITS以及cox2和nad1基因进行测序和系统进化分析,结果显示69条蛔虫样品包含犬弓首蛔虫28条、猫弓首蛔虫8条、狮弓蛔虫33条。犬科动物（北极狐、红狐和狼）的犬弓首蛔虫感染率为92.9%,猫科动物仅丛林猫有犬弓首蛔虫感染,感染率为66.7%。另外,研究显示狮弓蛔虫根据其宿主种类可进一步细分为三个亚类,即野生猫科动物感染的狮弓蛔虫为一类,狗和狼感染的狮弓蛔虫为一类,狐狸感染的狮弓蛔虫为另一类。从犬弓首蛔虫成虫cDNA扩增出TcHSP70AB、TcHSP70C和Tcs HSPOV25基因,经克隆测序,三个基因完整开放阅读框（ORF）长度分别为1926bp、429bp和348bp。经原核表达分析,重组蛋白rTcHSP70AB、rTcHSP70C和rTcsHSPOV25的分子量大小分别为90k Da、35k Da和33k Da。免疫印迹显示,三种重组蛋白均能被犬弓首蛔虫感染小鼠、犬及人阳性血清识别,证明其具有良好的反应原性和免疫原性。蛋白特征分析表明,TcHSP70AB、TcHSP70C主要分布于虫体表皮层、肌肉、肠壁以及雌虫子宫壁和雄虫精巢壁,而Tcs HSPOV25主要分布雌虫子宫虫卵以及虫体肠壁。转录水平分析发现,三个基因在犬弓首蛔虫L2感染期幼虫均有表达。分别以rTcHSP70AB、rTcHSP70C和rTcsHSPOV25作为包被抗原,通过“犬弓首蛔虫—小鼠感染”模型,建立间接ELISA方法。结果显示,以rTcHSP70AB/C和rTcsHSPOV25建立间接ELISA方法（rTcHSP70AB/C-i ELISA、rTcsHSPOV25-i ELISA）的最佳抗原包被浓度分别为10.31μg/m L、100μg/m L、3.44μg/m L,最佳血清稀释度分别为1:320、1:80、1:80,临界值分别为0.126、0.144、0.161,敏感性分别为96.9%、96.9%、53.1%,特异性分别为50%、100%、100%。结果显示rTcHSP70AB-i ELISA可在小鼠感染第5天检出,而rTcHSP70C-i ELISA可在小鼠感染第15天100%检出。由此本研究进一步对在上述两种间接ELISA方法进行条件优化,用于临床犬弓首蛔虫犬血清检测,结果显示,rTcHSP70AB-i ELISA的检出率为76.9%,rTcHSP70C-i ELISA的检出率仅为38.5%。比较结果得出:无论在早期诊断犬弓首蛔虫异宿主感染,还是在诊断犬犬弓首蛔虫感染上,rTcHSP70AB均优于rTcHSP70C。